Coomassie va kumush bilan bo'yash o'rtasidagi asosiy farq shundaki, kumassi bilan bo'yash - bu kumassi yorqin ko'k rangdan foydalanadigan oqsilni bo'yash usuli, tasmada bo'yash esa kumush bo'yoqdan foydalanadigan oqsilni bo'yash usulidir.
Proteinni ajratish va identifikatsiya qilish proteoma tahlilidagi muhim qadamlardir. Ular jel elektroforezidan keyin yuqori aniqlikdagi protein tavsifiga muhtoj. Anion bo'yoqlari (koomassi yorqin ko'k), metall kationlari (imidazol-sink), kumush bo'yoq va lyuminestsent bo'yoqlar va boshqalar kabi turli bo'yoqlarni o'z ichiga olgan ko'plab bo'yash usullari mavjud. Ba'zida radioaktiv zondlardan ham foydalanish mumkin. Bo'yash texnikasini tanlash soddaligi, laboratoriyada tasvirlash uskunasining mavjudligi va hokazolarga bog'liq.
Coomassie binoni nima?
Coomassie bo'yash - bu Coomassie yorqin ko'k rangdan foydalanadigan oqsil bo'yash usuli. U odatda koomassi ko'k texnikasi deb ataladi. Coomassie yorqin ko'k - eng mashhur anion oqsil-bo'yoq. Bu dog 'odatda deyarli barcha oqsillarni o'rtacha sezgirlikda yaxshi miqdoriy chiziqli bo'yadi. Coomassie yorqin ko'k rang deyarli barcha oqsillarga xos bo'lmagan holda bog'lanadi. Coomassie yorqin ko'k dog'ning ikki xil varianti mavjud: R-250 va G-250. R-250 qisqaroq bo'yash vaqtini taklif qiladi, G-250 esa sezgirroq va ekologik toza formulalarda mavjud.
01-rasm: Coomassie bo'yash
Coomassie bo'yoqlari massa-spektrometriya tadqiqotlari va oqsillarni aniqlash bo'yicha tadqiqotlarda juda mashhur. Bundan tashqari, bio-xavfsiz Coomassie dog'i hozirda bozorda mavjud bo'lgan Coomassie Blue G-250 ning xavfli bo'lmagan formulasidir. Ushbu formulaning afzalligi shundaki, uni yuvish va tozalash uchun faqat suv kerak bo'ladi. Bio-xavfsiz kumassi bo'yog'i an'anaviy koomassi ko'k G-250 ga teng sezuvchanlikni ta'minlaydi, lekin koomassi bo'yog'i R-250dan yaxshiroq. Bundan tashqari, u an'anaviy Coomassie ko'k G-250 ga qaraganda oddiyroq va tezroq bo'yash protokoliga ega. Coomassie ko'k binoni kamchiliklari kumush bo'yash bilan solishtirganda kamroq sezgir. Coomassie ko'k rangi kumush rangga qaraganda taxminan 50 baravar kam sezgir. Biroq, bog'lashda soddaligi tufayli u ko'plab tadqiqotlarda afzal ko'riladi.
Kumush bo'yash nima?
Kumush bo'yash - kumush bo'yoqdan foydalanadigan oqsil bo'yash usuli. Kumush bo'yash agaroz va poliakrilamid jellarini bo'yash uchun ishlatiladi. Agaroz jellarda oqsilni kumush rangga bo'yash birinchi marta 1973 yilda Kerenyi va Gallyas tomonidan ishlab chiqilgan. Keyinchalik, u SDS-PAGE da qo'llaniladigan poliakrilamid jellaridagi oqsillar uchun moslashtirildi. Hozirgi vaqtda kumush bo'yash DNK yoki RNKni bo'yash uchun ham qo'llaniladi. Jellarni bo'yash uchun bu usulda jellar kumush nitrat eritmasi bilan inkubatsiya qilinadi. Kumush bo'yash oqsillar mavjud bo'lgan joylarni jigarrangdan qora ranggacha bo'yadi.
02-rasm: Kumush bo'yash
Kumush bo'yalishining intensivligi oqsilning birlamchi tuzilishiga bog'liq. Bundan tashqari, ishlatiladigan idishlarning tozaligi va reagentlarning tozaligi ham kumushni bo'yash sifatiga ta'sir qilishi mumkin. Biroq, kumush bo'yashning kamchiliklari shundaki, u barcha oqsillarni, ayniqsa glikoproteinlarni va ularning yon zanjirlariga biriktirilgan katta modifikatsiyalangan oqsillarni aniqlay olmaydi.
Coomassie va kumush bilan bo'yash o'rtasidagi o'xshashliklar qanday?
- Coomassie va kumush bilan bo'yash oqsillarni bo'yashda qo'llaniladigan ikkita usuldir.
- Ular oqsillarni ham, DNKni ham bo'yab qo'yishi mumkin.
- Har ikkala binoni texnikasi ham kamchiliklarga ega.
- Bu usullarda tuzatish, boʻyash va boʻyash kabi qadamlar oʻxshash.
Coomassie va kumush bilan bo'yash o'rtasidagi farq nima?
Coomassie bo'yash - bu koomassi yorqin ko'k rangdan foydalanadigan oqsilni bo'yash usuli, tasmada bo'yash esa kumush bo'yoqdan foydalanadigan oqsilni bo'yash usulidir. Shunday qilib, bu Coomassie va kumush bo'yash o'rtasidagi asosiy farq. Bundan tashqari, Coomassie bo'yash kumush rangga qaraganda kamroq sezgir.
Quyidagi infografikada yonma-yon taqqoslash uchun Coomassie va kumush boʻyoq oʻrtasidagi farqlar jadval koʻrinishida keltirilgan.
Xulosa – Coomassie va Silver Staining
Oqsillarni ko'rish uchun oqsilga xos bo'yoqni bog'lash yoki rang hosil qiluvchi kimyoviy reaksiya amalga oshirilishi mumkin. Bu oqsilni bo'yash deb ataladi. Coomassie va kumush bo'yash oqsillarni bo'yashda ishlatiladigan ikkita usuldir. Coomassie bo'yash texnikasi coomassie yorqin ko'k rangdan, tasmada bo'yashda esa kumush dog'dan foydalaniladi. Demak, bu Coomassie va kumush bo'yash o'rtasidagi asosiy farq.
