BL21 va DH5 Alpha oʻrtasidagi asosiy farq shundan iboratki, BL21 asosan oqsillarni ifodalash uchun ishlatiladigan proteaz etishmovchiligi boʻlgan genetik jihatdan ishlab chiqilgan vakolatli E. coli hujayrasi boʻlsa, DH5 Alpha esa asosan recA1 mutatsiyasiga ega boʻlgan genetik jihatdan ishlab chiqilgan vakolatli E. coli hujayrasidir. plazmid transformatsiyasi uchun.
E. coli rekombinant oqsil ishlab chiqarish uchun tanlagan mashhur organizmlardan biridir. Bu yillar davomida eng mashhur ifoda platformasiga aylandi. U hujayra zavodi sifatida ham ishlatiladi. BL21 va DH5 Alpha hozirda mos ravishda oqsillarni ifodalash va plazmid transformatsiyasi uchun foydalaniladigan ikkita genetik muhandislik E. coli hujayralaridir.
BL21 nima?
BL21 proteaz etishmovchiligi bo'lgan genetik jihatdan ishlab chiqilgan vakolatli E.coli hujayrasi bo'lib, asosan oqsillarni ifodalash uchun ishlatiladi. E. coli BL21 B shtammidan olingan bakterial hujayradir. Unda Lon proteaza va ompT tashqi membrana proteazasi nuqsonlari mavjud. Odatda rekombinant oqsillarni ifodalash uchun ishlatiladi, chunki u odatda ifodalangan oqsillarga barqarorlik keltiradi. BL21 pCold I-IV DNK va pCold TF DNK bilan oqsillarni ifodalash uchun foydalidir. Ammo bu vakolatli E. coli hujayrasi PET tizimi kabi T7 promouteridan foydalangan holda protein ifodalash tizimi uchun mo'ljallanmagan. Buning sababi BL21 T7 RNK polimerazasini ifodalamaydi. Bundan tashqari, plazmidni qurish yoki tayyorlash uchun foydalanish tavsiya etilmaydi, chunki u recA mutatsiyasiga ega emas.
01-rasm: BL21
BL21 birinchi marta Studier tomonidan 1986 yilda B liniyasining turli modifikatsiyalaridan keyin tasvirlangan. BL21 hujayralarida ko'plab begona oqsillarni parchalaydigan LON proteazasi etishmaydi. Bundan tashqari, tashqi membrana proteazasini (OmpT) kodlaydigan boshqa gen yo'q, uning vazifasi hujayradan tashqari oqsillarni parchalashdir. Ushbu oqsillarning etishmasligi E. coli BL21 hujayralarida xorijiy oqsilning muvaffaqiyatli ishlab chiqarilishiga olib keladi. Bundan tashqari, bu hujayralardagi hsdSB mutatsiyasi BL21 hujayralarida begona DNK metilatsiyasi va buzilishining oldini oladi.
DH5 Alpha nima?
DH5 Alpha asosan plazmid transformatsiyasi uchun foydalaniladigan recA1 mutatsiyasiga ega boʻlgan genetik jihatdan ishlab chiqilgan vakolatli E. coli hujayrasidir. DH5 Alpha E. coli hujayralari transformatsiya samaradorligini maksimal darajada oshirish uchun amerikalik biolog Duglas Xanahan tomonidan genetik jihatdan ishlab chiqilgan. DH5 Alfa xujayrasi uchta aniq mutatsiyaga ega: recA1, endA1 va lacZDM15. recA1 - bu recA polipeptididagi glitsin 160 va aspartik kislota qoldig'i bilan almashtiriladigan yagona nuqta mutatsiyasi. Ushbu mutatsiya rekombinazlarning faolligini o'chiradi va gomologik rekombinatsiyani inaktiv qiladi. endA1 mutatsiyasi hujayra ichidagi endonukleazni inaktiv qiladi, bu uning kiritilgan plazmidni parchalanishiga yo'l qo'ymaydi.
02-rasm: DH5 Alpha
Bundan tashqari, lacZDM15 mutatsiyasi o'zgartirilgan hujayralarni ko'k-oq skrining qilish imkonini beradi. Bu hujayralar vakolatli hujayralardir. Ular ko'pincha kerakli plazmidni kiritish uchun k altsiy xlorid transformatsiyasi bilan ishlatiladi. Yaqinda o'tkazilgan tadqiqotlar natijasida aniqlanishicha, DH5 Alpha xujayrasi Hanahan usuli bilan plazmid transformatsiyasi uchun eng samarali vakolatli hujayra bo'lgan.
BL21 va DH5 Alpha oʻrtasidagi oʻxshashliklar qanday?
- BL21 va DH5 Alpha ikkita genetik muhandislik E.coli
- Ikkalasi ham vakolatli hujayralar.
- Ular alohida mutatsiyalardan iborat.
- Ikkalasida ham tabiiy yashash joyi yo'q.
- Bular ekspressiya tadqiqotlari va klonlash jarayonlari kabi laboratoriya maqsadlarida ishlatiladi.
BL21 va DH5 Alpha oʻrtasidagi farq nima?
BL21 proteaz etishmovchiligi bo'lgan genetik jihatdan ishlab chiqilgan vakolatli E. coli hujayrasi bo'lib, asosan oqsillarni ifodalash uchun ishlatiladi. Boshqa tomondan, DH5 Alpha asosan plazmid transformatsiyasi uchun ishlatiladigan recA1 mutatsiyasiga ega bo'lgan genetik jihatdan yaratilgan vakolatli E. coli hujayrasidir. Shunday qilib, bu BL21 va DH5 Alpha o'rtasidagi asosiy farq. Bundan tashqari, BL21 E. coli xujayrasi recA1 mutatsiyasiga ega emas, DH5 Alpha E. coli hujayrasida esa recA1 mutatsiyasi mavjud.
Quyidagi infografikada BL21 va DH5 Alpha oʻrtasidagi farqlar jadval koʻrinishida keltirilgan.
Xulosa – BL21 va DH5 Alpha
E. coli ning patogen bo'lmagan shtammlari genetik jihatdan olimlar tomonidan laboratoriya ekspressiyasini o'rganish va klonlash maqsadida ishlab chiqilgan. BL21 va DH5 Alpha genetik jihatdan yaratilgan ikkita E. coli hujayralaridir. BL21 asosan protein ekspressiyasini o'rganish uchun ishlatiladi. Boshqa tomondan, DH5 Alpha asosan plazmidlarni o'zgartirish uchun ishlatiladi. Shunday qilib, bu BL21 va DH5 Alpha oʻrtasidagi farqning qisqacha mazmuni.
