Benzonaza va DNase o'rtasidagi farq

2024 Muallif: Alex Aldridge | [email protected]. Oxirgi o'zgartirilgan: 2023-12-17 13:52

Asosiy farq – Benzonaz va DNase

Nuklein kislotalarning degradatsiyasi ko'plab molekulyar biologiya texnikasi uchun muhimdir. DNK va RNKning keraksiz qismlaridan xalos bo'lish uchun rekombinant DNK texnologiyasida keng qo'llaniladi. Nuklein kislotalarni parchalovchi fermentlar nukleazlar deb ataladi va ular kerakli funktsiyaga qarab har xil turdagi bo'lishi mumkin. DNKni buzadigan nukleazalar DNazalar, RNKni buzadiganlar esa RNazalar deb nomlanadi. Ushbu fermentlar asosan in vitro tajribalarida qo'llaniladi, bu erda sof DNK, RNK yoki oqsillarni ajratish uchun in vitro molekulyar testlar o'tkaziladi. Benzonazalar ham DNK, ham RNKni buzadigan nukleazalarning bir turi, DNazalar esa faqat DNKni buzadi. Bu benzonaz va DNase o'rtasidagi asosiy farq.

Benzonaza nima?

Benzonaza - bu Serratia marcescens'dan genetik jihatdan yaratilgan endonukleaza. Bu ferment E. coli xostlarida sanoat miqyosida ishlab chiqariladi. Benzonaza ikki zanjirli DNK, chiziqli DNK, aylana DNK va bir zanjirli RNKni parchalashga qodir. Shunday qilib, benzonaz tijoriy ahamiyatga ega. Benzonaza fermenti 245 ta bir xil aminokislotalarga ega bo'lgan oqsil dimeridir, ikkita muhim disulfid bog'lari bo'lgan ~ 30 kDa subbirliklarga ega. Benzonaza nuklein kislotalarni 5' uchida parchalaydi va natijada bo'sh 5' uchi bo'lgan parchalar hosil bo'ladi. Benzona har qanday ketma-ketlikda nuklein kislotalarni parchalashi mumkin, lekin GCga boy hududlarni afzal ko'radi.

Benzonaza -20 ^{0C da saqlanadi. Ferment faolligi uchun optimal pH 8,0 - 9,2 deb topildi. Benzonazning qo'llanilishi oqsil 2D gel elektroforezi uchun namuna tayyorlashni o'z ichiga oladi, bunda benzonaz bog'langan nuklein kislotalarni olib tashlaydi va rekombinant oqsil preparatlaridan nuklein kislota ifloslantiruvchi moddalarni olib tashlaydi. Shuningdek, u oqsil ekstraktining viskozitesini pasaytirish va hujayra aralashmasidagi hujayralar to'planishining oldini olish uchun ishlatiladi.}

DNase nima?

DNase - bu nukleaz, gidrolitik ferment bo'lib, u faqat ikki zanjirli DNKni parchalashga qodir. DNazalarning ikkita asosiy turi mavjud: DNase I va DNase II. DNase I 5' erkin uchlari bo'lgan polinukleotidlarni hosil qilish uchun ikki zanjirli DNKni parchalashda ishtirok etadi. DNase II ikki zanjirli DNKni parchalashda ishtirok etadi va 3' bo'sh uchlari yoki o'simtalari bo'lgan polinukleotid zanjirlarini hosil qiladi.

DNase I

DNase I 7,0 – 8,0 orasidagi optimal pH darajasida ishlaydi. Fermentning faolligi Ca²⁺, Mg²⁺ yoki Mn^{2+ kabi koʻplab ionli kofaktorlarga bogʻliq. Mg}2+ ^{va Mn}2+ ^{faolligi DNaz I funktsiyasini belgilaydi. Mg} ishtirokida 2+^{, DNase I dsDNKning har bir zanjirini mustaqil ravishda ajratadi. Bu tasodifiy tarzda sodir bo'ladi. Bundan farqli o'laroq, Mn}2+, ^{mavjudligida ferment ikkala DNK zanjirini taxminan bir xil joydan ajratadi. Bu parchalanish natijasida ikki turdagi DNK parchalari hosil bo'ladi; bir turi to‘mtoq uchlari, ikkinchisi esa bir yoki ikkita nukleotid o‘simtalari bilan.}

02-rasm: DNase

DNase II

DNase II 4,5-5,0 optimal pH darajasida ishlaydi va DNase I kabi faolligi uchun ikki valentli metall ionlari talab qilinadi. DNase II mexanizmi uchta asosiy bosqichdan iborat ekanligi ma'lum.

DNK magistralida bir nechta bitta zanjir uzilishi sodir boʻladi.
Kislotada eruvchan nukleotidlar va oligonukleotidlar hosil boʻladi.
Chiziqsiz giperxromli siljish oxirgi bosqichda sodir bo'ladi.

DNase fermentining asosiy ingibitorlari orasida metall xelatatorlar, oʻtish metallari va natriy dodesil sulfat va b – merkaptoetanol kabi kimyoviy moddalar mavjud.

DNazning asosiy qoʻllanilishi orasida DNKsiz RNK ekstraktlari va oqsil ekstraktlarini tayyorlash va in vitro transkripsiya tajribalarida shablon DNKni olib tashlash kiradi.

Benzonaza va DNase oʻrtasidagi oʻxshashliklar qanday?

Ikkalasi ham gidrolitik fermentlar.
Ikkalasi ham yadrodir.
Ikkalasi ham nuklein kislotalarning fosfodiester bogʻlarini ajratish orqali ishtirok etadi.
Ferment faolligini saqlab turish uchun ikkalasi ham optimal pH va saqlash haroratini talab qiladi.
Fermentlarning ingibitorlari qatoriga xelatlashtiruvchi moddalar, oʻtish metallari va kimyoviy yuvish vositalari kiradi.
Ilovalar asosan DNK, RNK va oqsillarning yuqori toza ekstraktlarini olishga qaratilgan.
Har ikkala ferment ham genetik muhandislik orqali ishlab chiqarilishi mumkin.

Benzonaza va DNase o'rtasidagi farq nima?

Benzonaza va DNase
Benzonaza ikki zanjirli DNK, chiziqli DNK, aylana DNK va RNKni ajratishga qodir ferment.	DNase - bu ikki zanjirli DNKni parchalash qobiliyatiga ega ferment.
Ferment uchun substrat
DNK ham, RNK ham benzonaza uchun substratdir.	DNK DNase uchun substratdir.
Tuzilishi
Benzonazaning optimal pH diapazoni 7,0 -8,0	DNase I ning optimal pH diapazonlari 7,0 – 8,0 va DNase II 4,5 – 5,0.

Xulosa – Benzonaz va DNase

Nukleaza fermentlari molekulyar biologiya va genetik muhandislik bo'yicha turli eksperimental jarayonlarda keng qo'llaniladi. Benzonaz va DNase ikki turdagi nukleazadir. Benzonaz DNK va RNKning parchalanishida, DNase esa ikki zanjirli DNKning parchalanishida ishtirok etadi. Bu benzonaz va DNase o'rtasidagi asosiy farq. Hozirda bu nukleazalarning ikkala turi ham rekombinant DNK texnologiyasi orqali ishlab chiqariladi, bu esa maksimal ishlab chiqarish uchun optimallashtirilgan yuqori sifatli fermentlarni beradi.

Benzonaza va DNasening PDF versiyasini yuklab oling

Siz ushbu maqolaning PDF-versiyasini yuklab olishingiz va iqtibos keltirgan holda oflayn maqsadlarda foydalanishingiz mumkin. Iltimos, PDF versiyasini bu yerdan yuklab oling Benzonaz va DNase o'rtasidagi farq