Asosiy farq – DNK va RNK ekstraktsiyasi
DNK va RNKni o'rganish molekulyar biologiya, biotexnologiya va genetikaning asosiy tushunchalarini tushunish uchun muhim jihatlardir. Ushbu tadqiqotlar davomida eksperimental jarayonlarni amalga oshirish uchun sof DNK va RNK namunalarini olish kerak. DNK va RNK ekstraktsiyasi o'rtasidagi asosiy farq shundaki, DNK ekstraktsiyasi DNKni tozalaydi, RNK ekstraktsiyasi esa RNKni tozalaydi. DNKni ekstraksiya qilish jarayoni uch xil bosqichdan iborat: hujayra lizisi va membrana lipidlari va oqsillarining katabolizmi, konsentrlangan tuz eritmasi bilan katabolitlarning to'planishi va DNKning etanol bilan cho'kishi. Uch bosqichli protsedura ikkita ixtiyoriy bosqichdan iborat bo'lishi mumkin. RNKni tozalash jarayoni to'rt xil bosqichdan iborat: hujayra lizisi uchun guanidiy tiosiyanat qo'shilishi, ribonukleazalarni o'z ichiga olgan oqsil denaturatsiyasi, xloroform va fenol qo'shilishi bilan RNKni ajratish va cho'kmani etanol yordamida yuvish.
DNK ekstraktsiyasi nima?
DNK ekstraktsiyasi - bu namunadan DNKni tozalash uchun ishlatiladigan fizik va kimyoviy jarayon. DNK ekstraktsiyasi molekulyar biologiya va sud-tibbiyot fanlari kontekstida muhim jihatdir. Jarayon uchta asosiy bosqichdan iborat. Dastlab, qiziqish hujayralarini olish kerak. Keyinchalik, hujayra membranasini sindirish uchun hujayra lizisi osonlashadi, bu hujayrani ochadi va DNK bilan birga sitoplazmani ochadi. Sirt faol moddalar yoki boshqa yuvish vositalaridan hujayra membranasidan lipidlarni parchalash uchun foydalanish mumkin, shu bilan birga mavjud bo'lgan oqsillar proteazlar tomonidan katabolize qilinadi. Bu ixtiyoriy qadamdir. Hujayra parchalangandan so'ng, katabolizatsiyalangan molekulalarning to'planishi konsentrlangan tuz eritmalari bilan osonlashadi. Shundan so'ng DNK dan qoldiq bo'laklarini ajratib turadigan eritmani sentrifugalash amalga oshiriladi. Bu bosqichda differentsiatsiyalangan DNK hujayra siklida ishlatiladigan reagentlar va tuzlar bilan aralashtiriladi.
01-rasm: DNK ekstraktsiyasi
Uni yanada tozalash uchun quyidagi amallardan foydalanish mumkin. Usullardan biri etanol cho'kmasi bo'lib, u muzli etanolni ajratilgan DNK namunasi bilan aralashtirishni o'z ichiga oladi. DNK alkogolda erimaydi va shu bilan DNK molekulalarining birikishi tufayli pellet hosil qiladi. Ushbu jarayonda ion kuchini oshirish orqali yog'ingarchilik darajasini oshirish uchun natriy asetat qo'shiladi. Buning uchun etanolni cho'ktirish jarayoniga qo'shimcha ravishda fenol-xloroformni ekstraktsiyalash jarayoni ham qo'llanilishi mumkin. Ushbu usulda fenol namunada mavjud bo'lgan oqsillarni denatüratsiya qiladi. Santrifüjdan so'ng, denatüratsiyalangan oqsillar organik fazada qoladi, xloroform bilan aralashtirilgan DNK molekulalari esa suvli fazada bo'ladi. Xloroform fenol qoldiqlarini olib tashlaydi. Ekstraksiya tugallangach, DNK TE buferida yoki ultra toza suvda eritiladi.
RNK ekstraktsiyasi nima?
RNKni tozalash - bu RNKni biologik namunadan tozalash jarayoni. Hujayralar va to'qimalarda ribonukleaza mavjudligi sababli bu jarayon murakkablashadi. Ribonukleaza fermenti RNKni tez parchalash qobiliyatiga ega. Ribonukleazalarning kimyoviy tabiati juda barqaror va ularni faolsizlantirish qiyin. Ribonukleazlarni zararsizlantirish variant hisoblanadi. Ushbu ferment hujayralar va to'qimalarda hamma joyda bo'lgani uchun RNK ekstraktsiyasi uchun maxsus texnikalar ishlab chiqilgan. Ko'p usullardan keng tarqalgan usul guanidinium tiosinat-fenol-xloroform ekstraktsiyasidir.
02-rasm: RNK ekstraktsiyasi
Guanidinium tiosinat-fenol-xloroformni ekstraksiya qilish usuli santrifüjlash va fazalarni ajratishga bog'liq. Santrifüj qilinadigan aralashma suvli namuna va fenol va xloroformdan iborat suv bilan to'yingan eritmadan iborat. Santrifüjdan so'ng eritma neytral pH sharoitida (pH 7-8) yuqori suvli faza va pastki organik fazadan iborat. RNK suvli fazada mavjud. Organik faza odatda fenolda erigan oqsillar va xloroformda erigan lipidlardan iborat. Xaotropik vosita (suv molekulalari orasidagi vodorod aloqalarini buzish qobiliyatiga ega bo'lgan molekula) qo'shiladi; bu guanidinium tiosiyanat deb nomlanadi. Ushbu agent RNKni parchalashi mumkin bo'lgan va hujayra lizisida ishtirok etadigan ribonukleazlarni o'z ichiga olgan oqsillarni denatüratsiya qilish qobiliyatiga ega. Shuningdek, u rRNKni ribosoma oqsillaridan ajratadi. RNKni tozalashning yakuniy bosqichi suvli fazaning cho'kmasini etanol bilan yuvishdir. RNKni suyuq azot yordamida ham tozalash mumkin.
DNK va RNK ekstraktsiyasi oʻrtasidagi oʻxshashliklar qanday?
- Har ikkala ekstraksiya jarayonida fenol va xloroform kabi zararli kimyoviy moddalardan foydalaniladi.
- Sentrifugalash ikkala jarayon uchun ham muhim texnikadir.
- Etanol cho'kmani yuvish va tozalangan DNK yoki RNK olish uchun ishlatiladi.
DNK va RNK ekstraktsiyasi o'rtasidagi farq nima?
DNK va RNK ekstraktsiyasi |
|
| DNK ekstraktsiyasi bu organizm yoki namunadan DNKni ajratib olish jarayonidir. | RNK ekstraktsiyasi namunadan RNKni ajratib olish jarayonidir. |
| Qadamlar | |
| DNK ekstraktsiya jarayoni ikkita ixtiyoriy bosqichli uchta turli bosqichdan iborat. | RNKni ajratib olish jarayoni toʻrt xil bosqichdan iborat. |
| Reagentlar | |
| DNK ekstraktsiyasi uchun sirt faol moddalar, proteazlar (ixtiyoriy), spirt, xloroform, fenol, natriy asetat ishlatiladi. | Guanidiy tiosiyanat, xloroform, fenol, etanol RNK ekstraktsiyasi uchun ishlatiladi. |
Xulosa – DNK va RNK ekstraktsiyasi
DNK va RNK ekstraktsiyasi molekulyar biologiya, genetika va biotexnologiyani o'rganish uchun eksperimental jarayonlarning muhim jihatlari hisoblanadi. Ikkala jarayon ham o'xshash reagentlarni o'z ichiga oladi, ammo RNK ekstraktsiyasi ribonukleazalarning faolligini pasaytiradigan Guanidium tiosiyanat deb nomlanuvchi maxsus reagentdan foydalanadi. Bu DNK va RNK ekstraktsiyasi o'rtasidagi asosiy farq.
DNK va RNK ekstraktsiyasining PDF versiyasini yuklab oling
Siz ushbu maqolaning PDF-versiyasini yuklab olishingiz va iqtibos keltirgan holda oflayn maqsadlarda foydalanishingiz mumkin. Iltimos, PDF versiyasini bu yerdan yuklab oling DNK va RNK ekstraktsiyasi o'rtasidagi farq
