An'anaviy ichki va real vaqtdagi PCR tahlillari o'rtasidagi asosiy farq shundaki, an'anaviy PCR bu DNKning o'ziga xos ketma-ketligini kuchaytirish uchun ishlab chiqilgan texnikadir va ichki PCR an'anaviy PCRning modifikatsiyasi bo'lib, ikkita ketma-ket kuchaytirish reaktsiyasidan iborat bo'lib, haqiqiy bo'lsa. -time PCR an'anaviy PCRning kuchaytirilgan mahsulot miqdorini aniqlashga qodir variantidir.
PCR DNKni aniqlash uchun tadqiqot va tibbiyotda keng qoʻllaniladigan juda keng tarqalgan ilmiy texnikadir. PCR testlari DNK yoki RNKni aniqlash orqali antijenlarni aniqlash uchun ishlatiladi. Umuman olganda, virusli RNK antikorlarni aniqlashdan yoki kasallik alomatlarini ko'rsatishdan oldin tanada mavjud. PCR testi odamda virus bor yoki yo'qligini erta aniqlashi mumkin. Hozirgi vaqtda PCR COVID-19 kasalligini aniqlash uchun standart test hisoblanadi. Haqiqiy vaqtda PCR, ichki o'rnatilgan PCR, multipleks PCR, hot start PCR va uzoq masofali PCR va boshqalar kabi PCR texnikasining har xil turlari mavjud.
An'anaviy PCR tahlillari nima?
An'anaviy PCR tahlili molekulyar biologik laboratoriyalarda muntazam ravishda bajariladigan in vitro DNKni kuchaytirish usulidir. Bu usul ma'lum bir DNK fragmentining minglab millionlab nusxalarini ishlab chiqarish imkonini berdi. Kari Mullis bu usulni 1980-yilda joriy qilgan. Ushbu texnika ko'p nusxalarini yaratish uchun shablon deb nomlanuvchi DNK bo'lagini talab qiladi. Taq polimeraza DNK polimeraza fermenti sifatida ishlaydi va shablon ketma-ketligining yangi zanjirlarini sintezini katalizlaydi.
PCR aralashmasidagi primerlar fragment kengaytmalari uchun boshlang'ich nuqta sifatida ishlaydi. DNK nusxalarini yaratish uchun zarur bo'lgan barcha ingredientlar PCR aralashmasiga kiritilgan. PCR reaktsiyasi PCR mashinasida amalga oshiriladi va u to'g'ri PCR aralashmasi va to'g'ri PCR dasturi bilan oziqlanishi kerak. Agar reaksiya aralashmasi va dastur toʻgʻri boʻlsa, u juda oz miqdordagi DNKdan DNKning maʼlum bir qismining kerakli miqdordagi nusxalarini hosil qiladi.
01-rasm: an'anaviy PCR tahlili
PZR reaktsiyasida uchta asosiy bosqich mavjud: denaturatsiya, primerni yumshatish va ipni kengaytirish. Ushbu uch bosqich uch xil haroratda sodir bo'ladi. PCR buferi Taq polimeraza ta'siri uchun optimal sharoitlarni saqlaydi. PCR reaktsiyasining ushbu uch bosqichi PCR mahsulotining kerakli miqdorini ishlab chiqarish uchun takrorlanadi. Har bir PCR reaktsiyasida DNK nusxalari soni ikki baravar ko'payadi. Demak, PCRda eksponensial kuchaytirish kuzatilishi mumkin. PCR mahsulotini gel elektroforezi yordamida hal qilish mumkin, chunki u jelda ko'rinadigan miqdorda DNK hosil qiladi va uni ketma-ketlik kabi keyingi tadqiqotlar uchun tozalash mumkin.
PCR tibbiy va biologik tadqiqotlarda qimmatli vositadir. Ayniqsa, sud-tibbiyot tadqiqotlarida PCR juda katta ahamiyatga ega, chunki u jinoyatchilarning kichik namunalarini o'rganish uchun DNKni kuchaytirishi va sud DNK profillarini yaratishi mumkin. PCR molekulyar biologiyaning ko'plab sohalarida keng qo'llaniladi, jumladan, genotiplash, genlarni klonlash, mutatsiyalarni aniqlash, DNK ketma-ketligi, DNK mikromassivlari va otalikni tekshirish.
Nested PCR tahlillari nima?
Nested PCR - bu DNKning o'ziga xos bo'lmagan kuchaytirilishini kamaytiradigan PCR turi. Ichki PCR tahlilida ikkita ketma-ket PCR yoki ikkita ketma-ket kuchaytirish reaktsiyasi mavjud. Birinchi kuchaytirish reaktsiyasi paytida PCR mahsuloti ishlab chiqariladi. Birinchi reaktsiyadan so'ng birinchi reaktsiyaning PCR mahsulotida ikkinchi kuchaytirish reaktsiyasi amalga oshiriladi. Shunday qilib, ikkinchi reaksiya aralashmasidagi primerlar birinchi PCR mahsuloti bilan bog'lanadi va uni kuchaytiradi.
02-rasm: ichki PCR
Primer juftlari har bir reaksiyada farq qiladi. Yuvalangan PCRda primerlarning o'ziga xos bo'lmagan bog'lanishi kamayadi. Ichki PCR tahlillari sezgirlik va/yoki o'ziga xoslikni oshirish uchun foydalidir. Biroq, ichki o'rnatilgan PCR qiziq ketma-ketlik haqida ma'lumot talab qiladi.
Real-time PCR tahlillari nima?
Real vaqtda PCR yoki miqdoriy PCR (Q PCR) PCR mahsulotlarini miqdoriy o'lchaydigan PCRning o'zgartirilgan versiyasidir. Shuning uchun, bu usul real vaqt rejimida PCR mashinasidan foydalangan holda real vaqt rejimida kuchaytirish miqdorini aniqlaydi. Bu, shuningdek, namunadagi maqsadli ketma-ketlik yoki gen miqdorini aniqlash uchun mos usul.
Haqiqiy vaqtda PCRning qiziqarli xususiyati shundaki, u kuchaytirish va haqiqiy miqdorni bir bosqichda birlashtiradi. Shuning uchun aniqlash uchun jel elektroforeziga bo'lgan ehtiyoj real vaqtda PCR texnikasi bilan bartaraf etilishi mumkin. PCR reaktsiyalari paytida PCR mahsulotlarini belgilash uchun floresan bo'yoqlardan foydalanish oxir-oqibat to'g'ridan-to'g'ri miqdorni aniqlashga olib keladi. PCR mahsulotlari to'planganda, floresan signallari ham to'planadi va ular real vaqt rejimida o'lchanadi. SYBR Green va Taqman real vaqtda PCRni kuchaytirish jarayonini aniqlash yoki kuzatishning ikkita usulidir. Ikkala usul ham kuchaytirish jarayonining borishini kuzatib boradi va real vaqtda mahsulot miqdori haqida xabar beradi.
03-rasm: real vaqtda PCR
Real-vaqtdagi PCR gen ekspressiyasini aniqlash, mikroRNK va kodlanmagan RNK tahlili, SNP genotiplash, nusxa soni variantlarini aniqlash, nodir mutatsiyalarni aniqlash, genetik jihatdan oʻzgartirilgan organizmlarni aniqlash va boshqalar kabi keng koʻlamli ilovalarga ega. yuqumli agentlarni aniqlash.
An'anaviy o'rnatilgan va real vaqtda PCR tahlillari o'rtasidagi o'xshashliklar qanday?
- Ichki va real vaqtda PCR tahlillari an'anaviy PCR tahlilining modifikatsiyalaridir.
- Har uchala usul ham DNK namunalarini kuchaytiradi.
- Ularning mahsulotlari ketma-ketlik yoki tahlilda ishlatilishi mumkin.
- Bu tahlillar primerlarni talab qiladi.
An'anaviy o'rnatilgan va real vaqtda PCR tahlillari o'rtasidagi farq nima?
An'anaviy PCR - bu DNKning ma'lum ketma-ketliklarini kuchaytirish uchun ishlab chiqilgan usul. Shu bilan birga, Nested PCR an'anaviy PCR ning modifikatsiyasi bo'lib, u ikkita ketma-ket kuchaytirish reaktsiyasidan iborat va real vaqtda PCR an'anaviy PCRning kuchaytirilgan mahsulot miqdorini aniqlashga qodir variantidir. Shunday qilib, bu an'anaviy ichki va real vaqtda PCR tahlillari o'rtasidagi asosiy farq. An'anaviy va real vaqtda PCRdan farqli o'laroq, ichki PCR ikkita primer to'plamidan foydalanadi. Bundan tashqari, o'ziga xos bo'lmagan kuchaytirishni kamaytirish uchun ichki PCRda ikkita ketma-ket kuchaytirish reaktsiyasi mavjud. bundan tashqari, an'anaviy va real vaqtda PCR tahlillari ikkita ketma-ket kuchaytirish reaktsiyasini o'z ichiga olmaydi.
Quyidagi infografikada yonma-yon taqqoslash uchun an'anaviy ichki va real vaqtdagi PCR tahlillari o'rtasidagi farqlar jadval ko'rinishida keltirilgan.
Xulosa - An'anaviy va ichki o'rnatilgan va real vaqtda PCR tahlillari
An'anaviy PCR - bu DNKning o'ziga xos qismlarini kuchaytirish uchun ishlab chiqilgan birinchi usul. Ichki PCR va real vaqtda PCR an'anaviy PCRning ikkita variantidir. Ikkita ketma-ket kuchaytirish reaktsiyasi va ichki PCRda ikkita primer to'plamidan foydalanish mavjud. Kuchaytirilgan PCR mahsulotini aniqlash uchun real vaqtda PCR ishlab chiqilgan. Shunday qilib, bu an'anaviy ichki va real vaqtda PCR tahlillari o'rtasidagi farqni umumlashtiradi.
