PCR va real vaqtda PCR
PCR yoki Polimeraza zanjiri reaktsiyasi zamonaviy molekulyar biologiyadagi inqilobli kashfiyot bo'lib, u birinchi marta 1983 yilda kimyogar Kari Mullis tomonidan ishlab chiqilgan. Bu murakkab DNKdagi bitta ketma-ketlikni tahlil qilish uchun kuchaytirish imkonini beradi. PCRning asosiy g'oyasi shundaki, DNK ketma-ketligining qarama-qarshi zanjirlarini to'ldiruvchi ikkita primer bir-biriga yo'n altirilgan; primerlar bir-birini to'ldiruvchi iplarni hosil qiladi, ularning har biri boshqa primerni o'z ichiga oladi. Demak, natijada ikkita primer o'rtasida joylashgan DNKga mos keladigan katta miqdordagi ketma-ketlik paydo bo'ladi. DNK polimeraza fermenti PCRda primerlarni kengaytirish uchun ishlatiladi. DNK polimeraza termostabil ferment bo'lib, DNK shablonini denaturatsiya qilish uchun ishlatiladigan yuqori haroratlarda (94 dan 95 °C gacha) omon qolish qobiliyatiga ega.
PZR uch bosqichni o'z ichiga oladi, ya'ni takroriy denatürasyon, primerlarning tavlanishi va DNK sintezi. Ushbu reaksiyani amalga oshirish uchun termosikl mashinasi ishlatiladi, shuning uchun u haroratni tez va aniq o'zgartirish uchun dasturlashtirilishi mumkin. PCR qo'llanilishi jinoiy tadqiqotlar, DNK barmoq izlari, patogenlarni aniqlash va insonning dastlabki turlarining DNK tahlilidir.
An'anaviy PCR nima?
An'anaviy PCRning uchta asosiy bosqichi mavjud, xususan; DNKni kuchaytirish bosqichi, PCRni ajratish va mahsulotlarni aniqlash. DNK segmentlarini ajratish odatda agaroz gel elektroforezi bilan amalga oshiriladi. Keyin mahsulotlar eteyduim bromidi bilan bo'yaladi. Nihoyat, aniqlash ultrabinafsha nurlari ostida jellarga bantlarni vizualizatsiya qilish orqali erishiladi. Shuning uchun an'anaviy PCRning yakuniy natijalari raqamlar bilan ifodalanmaydi. Odatda an'anaviy PCR faqat bitta parametrni aniqlay oladi.
Real-time PCR nima?
Real-vaqtdagi PCR mahsulotlarning kuchaytirilishini aniqlay oladi, chunki mahsulotlar sintezlanadi. Texnologiyaning rivojlanishi bilan PCR, ayniqsa, oziq-ovqat mahsulotlaridagi bakteriyalarni aniqlash va aniqlash uchun juda mashhur texnikaga aylandi. Haqiqiy vaqtda PCR floresan bo'yoq tizimi va lyuminestsentni aniqlash qobiliyati bilan jihozlangan termosikldan foydalanadi.
An'anaviy PCR va real vaqtda PCR o'rtasidagi farq nima?
• An'anaviy PCR ko'proq vaqt talab etadi, chunki u kuchaytirilgan PCR mahsulotlarini tahlil qilish uchun gel elektroforezidan foydalanadi. Aksincha, real vaqtda PCR kamroq vaqt talab etadi, chunki u reaktsiyaning dastlabki bosqichlarida kuchayishni aniqlay oladi.
• Haqiqiy vaqtda PCR PCRning eksponensial o'sish bosqichida ma'lumotlarni to'playdi, an'anaviy PCR esa reaktsiyaning yakuniy nuqtasida ma'lumotlarni to'playdi.
• An'anaviy PCRning yakuniy natijalari unchalik aniq bo'lmasligi mumkin, ammo real vaqtda PCR natijalari juda aniq.
• Haqiqiy vaqtdagi PCR an'anaviy PCRga qaraganda sezgirroq.
• An'anaviy PCR juda yomon ruxsatga ega, real vaqtda PCR esa yuqori aniqlik tufayli juda kam o'zgarishlarni aniqlay oladi.
• An'anaviy PCRning yakuniy nuqtasini aniqlash qisqa dinamik diapazonga ega, real vaqtda PCR aniqlash esa keng dinamik diapazonga ega.
• An'anaviy PCRdan farqli o'laroq, avtomatlashtirilgan aniqlash usullari real vaqtda PCRda topiladi.
• An'anaviy PCR real vaqtdagi PCRga qaraganda ancha murakkab va mehnat talab qiladi.
• Haqiqiy vaqtdagi PCRdan farqli o'laroq, an'anaviy PCR o'lik va tirik bakteriyalarni ajrata olmaydi.
• Haqiqiy vaqtda PCR mahsulotlarni aniqlash uchun lyuminestsent boʻyoq tizimidan foydalanadi, anʼanaviy PCR esa agaroz jel muhitidagi chiziqlarni koʻrish uchun etidiy bromid va UV nuridan foydalanadi.
