Xromatofokuslash va izoelektrik fokuslash oʻrtasidagi asosiy farq shundaki, xromatofokuslash ion almashinadigan qatronlardan foydalanadigan ustun xromatografiya usulidir, izoelektrik fokuslash esa immobilizatsiyalangan pH gradient jellaridan foydalanadigan elektroforez texnikasining bir turi.
Xromatofokus va izoelektrik fokuslash oqsillarni izoelektrik nuqtalariga ko'ra ajratadigan ikkita usuldir. Xromatofokuslash ham, izoelektrik fokuslash ham katta hal qiluvchi kuchga ega. Xromatofokus - bu yuqori aniqlikdagi ustunli xromatografiya usuli, izoelektrik fokuslash esa elektroforetik ajratish usuli. Bundan tashqari, xromatofokus elektr maydonidan foydalanmaydi, izoelektrik fokuslash esa elektr maydoniga muhtoj.
Xromatofokus nima?
Xromatofokuslash - bu oqsillarni izoelektrik nuqtasidagi farqlarga ko'ra ajratadigan yuqori elutsiyali xromatografiya turi. U ion almashinuvi qatroni ustunidan va ichki ishlab chiqilgan pH gradientidan foydalanadi. Izoelektrik fokuslashdan farqli o'laroq, xromatofokuslash elektr maydonini o'z ichiga olmaydi. Xromatofokus - bu juda o'xshash molekulalarni hatto 0,02 pH birliklari bilan farq qiladigan kuchli tozalash usuli. Shuning uchun xromatofokuslash juda oʻxshash komponentlarni ajratishda yuqori aniqlik zarur boʻlganda oxirgi abraziv qadam sifatida eng mos keladi.
Xromatofokuslashda namuna boshlang'ich bufer bilan aralashtirish orqali ustunga qo'llaniladi. Izoelektrik nuqtasidan yuqori pH darajasida bo'lgan oqsillar manfiy zaryadlangan va ular ustunning yuqori qismida qoladilar, boshqa oqsillar esa izoelektrik nuqtasidan past bo'lgan pH darajasida bo'lib, ustun pastga ko'chiriladi. Eng yuqori izoelektrik nuqtasi bo'lgan oqsil birinchi bo'lib, eng past izoelektrik nuqtaga ega bo'lgan oqsil esa ustundan so'nggida chiqariladi. Bu usulga oqsil yogʻinlari va pH gradientining chiziqliligi kabi bir qancha omillar taʼsir koʻrsatadi.
Izoelektrik fokuslash nima?
Izoelektrik fokuslash - bu turli molekulalarni izoelektrik nuqtasiga qarab ajratadigan usul. U elektrofokus sifatida ham tanilgan. Ushbu usul ko'pincha jelda oqsillarni ajratish uchun ishlatiladi. Izoelektrik fokuslashda namuna immobilizatsiyalangan pH gradienti (IPG) jellariga qo'shiladi. IPG gel - bu pH gradienti bilan kopolimerlangan akrilamid jel matritsasi. Oqsillar o'zlarining izoelektrik nuqtalarining pH mintaqasini topgunlaricha katod tomon ko'chib o'tadilar. Protein aniq zaryadsiz pH darajasiga yetganda, migratsiya to'xtaydi va statsionar chiziqni beradi. Xuddi shunday, har bir oqsil o'zining izoelektrik nuqtasiga to'g'ri keladigan pH gradientining bir nuqtasida band beradi.
01-rasm: Isoelektrik fokuslash
Izoelektrik fokuslash ikki oʻlchovli gel elektroforezining birinchi bosqichidir. Bu texnikada oqsillar avval izoelektrik nuqtalariga qarab izoelektrik fokuslash orqali ajratiladi, so‘ngra SDS-PAGE orqali molekulyar og‘irligi bo‘yicha ajratiladi.
Xromatofokuslash va izoelektrik fokuslash oʻrtasidagi oʻxshashliklar qanday?
- Xromatofokus va izoelektrik fokuslash ikkita yuqori aniqlikdagi usullardir.
- Ikkalasi ham oqsillarning izoelektrik nuqtasiga asoslangan.
- Bu usullar pH gradientidan foydalanadi.
- Ikkala protsedura ham inson gemoglobini variantlarini tavsiflash uchun ma'lumot beradi.
- Ular pI qiymatlari 0,02 pH birliklari bilan farq qiladigan molekulalarni hal qila oladi.
Xromatofokuslash va izoelektrik fokuslash oʻrtasidagi farq nima?
Xromatofokuslash - bu oqsillarni izoelektrik nuqtasiga qarab ajratadigan yuqori aniqlikdagi ustunli xromatografiya usuli. Bundan farqli o'laroq, izoelektrik fokuslash elektroforetik usul bo'lib, kapillyarda hosil bo'lgan pH gradienti bo'ylab elektr maydonini qo'llash orqali oqsillarni izoelektrik nuqtasiga ko'ra ajratadi. Demak, bu xromatofokus va izoelektrik fokuslash oʻrtasidagi asosiy farq.
Xromatofokus va izoelektrik fokuslash oʻrtasidagi yana bir farq shundaki, xromatofokuslash elektr maydonini oʻz ichiga olmaydi, izoelektrik fokuslash esa elektr maydonini talab qiladi.
Xulosa – Xromatofokus va izoelektrik fokuslash
Xromatofokuslash va izoelektrik fokuslash molekulalarning, ayniqsa juda o'xshash molekulalarning yuqori ajralish qobiliyatiga ega bo'lgan ikkita o'xshash texnikadir. Xromatofokus - bu yuqori aniqlikdagi ustunli xromatografiya usuli, izoelektrik fokuslash esa elektroforez usulidir. Xromatofokuslash, izoelektrik fokuslashdan farqli o'laroq, elektr maydonini o'z ichiga olmaydi. Shunday qilib, bu xromatofokus va izoelektrik fokuslash o'rtasidagi farqni umumlashtiradi.
