RP HPLC va HIC o'rtasidagi asosiy farq shundaki, RP HPLC ko'proq qutbli mobil faza va kamroq qutbli statsionar fazadan foydalanadi. Holbuki, HIC hidrofobik statsionar fazadan foydalanadi, bu esa unga hidrofobik molekulalarning biriktirilishiga imkon beradi.
Xromatografiya aralashmani uning tarkibiy qismlariga ajratishga yordam beradigan analitik usuldir. Birinchidan, biz eritmaga ajratiladigan namunani eritib olishimiz kerak. Bu eritma-modda aralashmasi mobil faza deb ataladi. Keyin mobil faza statsionar faza deb ataladigan boshqa materialdan o'tadi. Statsionar faza komponentlarning ajralishini belgilaydi. Ajralish materialning mobil faza va statsionar faza o'rtasida bo'linishi tufayli sodir bo'ladi.
RP HPLC nima?
RP HPLC atamasi teskari fazali yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasini anglatadi. Bu aralashmaning tarkibiy qismlarini hidrofobiklikka ko'ra ajratishni o'z ichiga oladi. Harakatlanuvchi fazadagi hidrofobik komponentlar statsionar fazadagi immobilizatsiyalangan hidrofobik ligandlar bilan bog‘lanadi, gidrofil komponentlar esa statsionar faza yuzasiga yopishmasdan statsionar fazadan o‘tadi.
01-rasm: HPLC apparati
Bundan tashqari, bu usul boshqa xromatografik usullarga nisbatan koʻproq takrorlanuvchanlikka ega va u keng qoʻllanilishini ham koʻrsatadi. Shuning uchun biz ushbu usulni laboratoriyalarda barcha HPLC usullarining 75% dan ortig'i uchun ishlatamiz. Ko'pincha biz harakatlanuvchi faza sifatida aralashadigan qutbli organik erituvchi bilan suvning suvli aralashmasidan foydalanamiz. Shunday qilib, u eritmadagi hidrofobik komponentlarning statsionar faza yuzasiga biriktirilishini ta'minlaydi.
HIC nima?
HIC atamasi gidrofobik oʻzaro taʼsir xromatografiyasini anglatadi. Bu teskari fazali HPLC ning bir turi bo'lib, bu usul asosan oqsillar kabi yirik biomolekulalarni ajratish uchun ishlatiladi. Bu usulda biomolekula namunasini olish uchun suvli muhitdan foydalanishimiz kerak. Chunki organik erituvchilar oqsillarning denaturatsiyasiga olib kelishi mumkin. Bundan tashqari, ushbu uslub statsionar fazaning ozgina hidrofobik yuzasiga ega bo'lgan katta molekulalar orasidagi o'zaro ta'sirdan foydalanadi. Bundan tashqari, biz namunadagi yuqori tuz konsentratsiyasidan foydalanishimiz kerak, chunki u oqsilni qadoqda ushlab turishga undaydi; bu jarayon tuzlash deb ataladi. Tuz konsentratsiyasini asta-sekin kamaytirish orqali biz biomolekulalarni hidrofobikligiga qarab alohida elutsiya qilishimiz mumkin.
Odatda bu usulda ion almashinadigan xromatografiyaga qarama-qarshi sharoitlardan foydalaniladi. Ushbu texnikada, birinchi navbatda, namunadagi erigan moddaning eritmasini kamaytirish uchun ustun orqali bufer eritmasini o'tkazishimiz kerak. Proteinning hidrofobik hududlarini ochishga majbur qiladi. Biroq, molekula ko'proq hidrofobik bo'lsa, bog'lanishni kuchaytirish uchun kamroq tuz kerak bo'ladi. Bu erda birinchi navbatda kamroq hidrofobik eritmalar, tuz konsentratsiyasining o'zgarishiga ko'ra, ko'proq hidrofobik eritmalar so'nggida elut qilinadi.
RP HPLC va HIC o'rtasidagi farq nima?
Xromatografiya - aralashmadagi komponentlarni ajratishning analitik usuli. RP HPLC va HIC ikkita maxsus xromatografik texnikadir. RP HPLC va HIC o'rtasidagi asosiy farq shundaki, RP HPLC ko'proq qutbli mobil faza va kamroq qutbli statsionar fazadan foydalanadi, HIC esa hidrofobik statsionar fazadan foydalanadi, bu esa hidrofobik molekulalarning unga yopishishiga imkon beradi.
Quyidagi infografikada RP HPLC va HIC oʻrtasidagi farq jamlangan.
Xulosa – RP HPLC va HIC
Xromatografiya - aralashmadagi komponentlarni ajratishning analitik usuli. RP HPLC va HIC ikkita maxsus xromatografik texnikadir. RP HPLC va HIC o'rtasidagi asosiy farq shundaki, RP HPLC ko'proq qutbli mobil faza va kamroq qutbli statsionar fazadan foydalanadi, HIC esa hidrofobik statsionar fazadan foydalanadi, bu esa hidrofobik molekulalarning unga biriktirilishiga imkon beradi.
