FPLC va HPLC asosiy farqi shundaki, FPLC suyuq xromatografiya turi boʻlib, oqsillar, nukleotidlar va peptidlar kabi yirik biomolekulalarni tozalaydi, HPLC esa kichik molekulyar ogʻirlikdagi birikmalarni ajratuvchi suyuq xromatografiya turidir.
Suyuq xromatografiya - bu namunani alohida tarkibiy qismlarga ajratish uchun ishlatiladigan usul. Bu ajratish muayyan namunalarning mobil va statsionar fazalar bilan o'zaro ta'siri tufayli yuzaga keladi. Namuna ichidagi komponentlar suyuq xromatografiyada har bir komponentning mobil fazaga yaqinligi asosida ajratiladi. Ko'chma faza va namuna ustundan o'tayotganda, namunaning tarkibiy qismlari UV-VIS spektroskopiyasi orqali aniqlanishi mumkin bo'lgan bantlarga ajrala boshlaydi. Shuning uchun FPLC va HPLC suyuqlik xromatografiyasining ikki turidir.
FPLC nima?
FPLC - oqsillar, nukleotidlar va peptidlar kabi yirik biomolekulalarni tozalaydigan suyuq xromatografiya turi. Tez oqsil suyuq xromatografiyasi (FPLC) birinchi marta Shvetsiyada Pharmacia kompaniyasi tomonidan 1982 yilda ishlab chiqilgan va sotilgan. U ko'pincha oqsil aralashmalarini tahlil qilish yoki tozalash uchun ishlatiladi. Bu harakatlanuvchi suyuqlik (mobil faza) va g'ovakli qattiq material (statsionar faza) uchun namuna komponentlarining yaqinlik printsipi asosida amalga oshiriladi. FPLC da mobil faza bufer, statsionar faza esa boncuklardan tashkil topgan qatronlardir. Odatda silindrsimon shisha yoki plastik ustunga o‘ralgan o‘zaro bog‘langan agarozadan iborat.
01-rasm: FLPC (Tez oqsilli suyuqlik xromatografiyasi) apparati
FLPC strategiyasining aksariyatida ion almashinuvi qatroni ishlatiladi. Shuning uchun, qiziqish oqsili qatron bilan zaryad o'zaro ta'siri bilan bog'lanadi. FLPC texnikasi ikkita buferdan ham foydalanadi: bufer 1 (ishlaydigan bufer) va bufer 2 (elutsiya buferi). Dastlab, bufer va namuna aralashmasi kolonnadan o'tayotganda, aralashmadagi qiziqish oqsili zaryad o'zaro ta'sirida qatron bilan bog'lanadi. Ammo jarayon oxirida elutsiya buferi kolonna bo'ylab o'tganda, qiziqish oqsili dissotsiatsiyalanadi va elyusiya buferidagi eritmaga qaytadi. Keyinchalik, eritma (qiziqilgan proteinni o'z ichiga olgan eliant) tuz konsentratsiyasi va oqsil kontsentratsiyasini o'lchaydigan ikkita detektordan o'tadi. Har bir oqsil elutsiya qilinganda, u aniqlash vaqtida “cho'qqi” sifatida ko'rinadi va keyingi foydalanish uchun to'planishi mumkin.
HPLC nima?
HPLC suyuq xromatografiya turi boʻlib, kichik molekulyar ogʻirlikdagi birikmalarni ajratadi. 1969 yilda birinchi HPLC tijorat maqsadida AQShning Waters korporatsiyasi tomonidan ishlab chiqarilgan. Yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasida (HPLC) erituvchidagi (mobil faza) namuna aralashmasi (analit) yuqori bosimda xromatografik qadoqlash materiali (statsionar faza) bilan kolonna orqali pompalanadi. Namuna aralashmasi geliy yoki azotning harakatlanuvchi gaz oqimi orqali tashiladi.
02-rasm: HPLC (Yuqori unumdorlikdagi suyuqlik xromatografiyasi)
Namuna aralashmasidagi statsionar faza bilan eng kam ta'sirga ega yoki mobil faza bilan eng ko'p o'zaro ta'sirga ega bo'lgan komponentlar ustundan tezroq chiqib ketadi. Boshqa tomondan, statsionar faza bilan eng ko'p o'zaro ta'sirga ega bo'lgan yoki mobil faza bilan eng kam miqdordagi o'zaro ta'sirga ega bo'lgan namuna aralashmasidagi komponentlar ustundan sekinroq chiqadi. Yuqoridagi o'zaro ta'sir printsipiga asoslanib, namuna aralashmasining tarkibiy qismlarini ajratish mumkin. Bundan tashqari, asbob detektori ustundan chiqadigan namuna aralashmasining har bir komponentini aniqlaydi. HPLC atrof-muhit va biologik namunalarni giyohvand moddalar, toksinlar yoki pestitsidlar kabi ma'lum birikmalar mavjudligi yoki yo'qligi uchun tekshirish uchun ishlatiladi. U farmatsevtika, atrof-muhit, sud tibbiyoti va kimyo kabi turli sohalarda qo'llaniladi.
FPLC va HPLC o'rtasidagi o'xshashliklar qanday?
- FPLC va HPLC suyuq xromatografiya turlaridir.
- Ikkalasi ham biologik namunalarni ajratish va aniqlash uchun ishlatiladi.
- Ularning suyuq harakatlanuvchi fazasi va qattiq statsionar fazasi bor.
- Ikkala usulda ham namunadan oʻtish uchun ustundan foydalaniladi.
- Bu usullar namunalarni ajratish va aniqlash uchun nasoslar, detektorlar, klapanlar va dasturlardan foydalanadi.
FPLC va HPLC o'rtasidagi farq nima?
FPLC suyuq xromatografiyaning bir turi boʻlib, oqsillar, nukleotidlar va peptidlar kabi yirik biomolekulalarni tozalash uchun ishlatiladi. HPLC suyuq xromatografiyaning bir turi bo'lib, kichik molekulyar og'irlikdagi birikmalarni ajratish uchun ishlatiladi. Shunday qilib, bu FPLC va HPLC o'rtasidagi asosiy farq. Bundan tashqari, FPLC pH va o'tkazuvchanlik monitorlaridan, shuningdek, fraktsiya kollektorlaridan foydalanadi. Aksincha, HPLC pH va o'tkazuvchanlik monitorlari va fraksiya kollektorlaridan foydalanmaydi.
Quyidagi infografikada FPLC va HPLC oʻrtasidagi farqlar jadval koʻrinishida keltirilgan.
Xulosa – FPLC va HPLC
Xromatografiya - aralashmadan tarkibiy qismlarni ajratish uchun ishlatiladigan laboratoriya tahlil usuli. U ustun xromatografiyasi, gaz xromatografiyasi, suyuqlik xromatografiyasi, ion almashinadigan xromatografiya va boshqalar kabi bir necha turlarga bo'linadi. FPLC va HPLC suyuqlik xromatografiyasining ikki turidir. FPLC suyuq xromatografiyaning bir turi bo'lib, oqsillar, nukleotidlar va peptidlar kabi yirik biomolekulalarni tozalash uchun ishlatiladi. Boshqa tomondan, HPLC suyuq xromatografiyaning bir turi bo'lib, u kichik molekulyar og'irlikdagi birikmalarni ajratish uchun ishlatiladi. Shunday qilib, bu FPLC va HPLC o'rtasidagi farqning qisqacha mazmuni.
