GFP va EGFP oʻrtasidagi asosiy farq shundaki, GFP sut emizuvchi boʻlmagan hujayralarni molekulyar klonlashda qoʻshilgan yovvoyi tipdagi oqsil boʻlib, EGFP esa sutemizuvchilar hujayralarida qoʻllanilishi mumkin boʻlgan takomillashtirilgan yoki ishlab chiqilgan GFP turidir..
Molekulyar klonlash olimlar rekombinant texnologiya orqali oqsillarni ifodalashda keng qoʻllaydigan ilgʻor texnikadir. Rekombinant DNK texnologiyasida rekombinant vektorni mezbon organizmga muvaffaqiyatli aylantirish zarur. Demak, transformatsiya jarayonida qiziqish genining xostga o'zgargan yoki o'zgartirilmaganligini aniqlash va tasdiqlash kerak. Buni baholash uchun molekulyar biologlar bir nechta usullarni qo'llashadi. Ushbu usullardan biri reportyor geni. Ushbu reportyor genlar to'g'ri transformantlarni tanlash uchun tanlangan belgilar sifatida ishlaydi. Shunday qilib, Yashil lyuminestsent oqsil (GFP) va Kengaytirilgan yashil lyuminestsent oqsil (EGFP) molekulyar klonlashda ishlatiladigan ikkita reportyor oqsildir.
GFP nima?
GFP 238 ta aminokislota qoldiqlarini va uni boshqa lyuminestsent oqsillardan ajratib turadigan aminokislotalar ketma-ketligining bir nechta tanlanadigan hududlarini o'z ichiga olgan yovvoyi turdagi oqsildir. Bundan tashqari, bu yovvoyi turdagi oqsil dastlab Aequorea Victoria dan izolyatsiya qilingan; meduzalarning bir turi. Biroq, tabiiy hodisalarda meduza ma'lum ogohlantirishlarga javoban yashil rangli floresan hosil qila oldi.
Avvalroq bu kontseptsiya olimlarni hayratda qoldirgan va ular uni o'zlarining rekombinant DNK texnologiyalarida qo'llashga qaror qilishgan. Shunday qilib, olimlar yovvoyi genning mutant shaklini o'zlarining gen ekspressiyasini o'rganishda reportyor gen sifatida ishlatishdi. GFP ning yovvoyi geni xona haroratida yoki ultrabinafsha nurlar ostida floresan hosil qiluvchi oqsil ishlab chiqarishga qodir. Shuning uchun transformatorlarga kiritilganda u floresansni ifodalaydi va hosil qiladi. Transformatsiya jarayonidan so'ng floresan hosil bo'lsa, bu transformatsiya jarayonining muvaffaqiyatini tasdiqlaydi. Oddiy so‘z bilan aytganda, lyuminestsent emissiyasi qiziqtiruvchi genni xostga o‘tkazuvchi vektorning muvaffaqiyatli transformatsiyasidan dalolat beradi.
01-rasm: GFP
Shu sababli, GFP gen ifodasining in vivo belgisi sifatida ishlaydi. Hozirgi vaqtda GFP ishlab chiqarish uchun genetik muhandislik texnikasi qo'llanilmoqda. Shuningdek, EGFP kabi GFPning ko'plab takomillashtirilgan versiyalari mavjud. Shunday qilib, bu molekulyar klonlash va gen ekspressiyasini o'rganishda GFPdan samarali foydalanish imkonini beradi.
EGFP nima?
Enhanced Green Fluorescent Protein yoki EGFP GFPning takomillashtirilgan versiyasidir. Oddiy so'zlar bilan aytganda, biz EGFPni yovvoyi turdagi GFPning ishlab chiqilgan versiyasi sifatida belgilashimiz mumkin. GFP ning yovvoyi geni mutatsiyaga uchraganda, u foydali ta'sir ko'rsatadi. Shunday qilib, GFP ning mutatsiyaga uchragan geni yangi belgilarni ifodalashga imkon beradi va buning natijasida biz yaxshilangan xususiyatlarga ega Kengaytirilgan GFP ni ishlab chiqarishimiz mumkin. Bundan tashqari, nurlanish yoki kimyoviy usullar yordamida yovvoyi turdagi GFP geniga mutatsiyalarni muvaffaqiyatli kiritishimiz mumkin. Bu mutatsiyaga uchragan genlar keyinchalik foydaliroq xususiyatlarga ega EGFP ni hosil qiladi.
02-rasm: EGFP
EGFPning yaxshilangan xususiyatlari quyidagilardan iborat;
- Kuchliroq floresans signallarini chiqarishga qodir.
- Sezuvchanligi yuqori.
- Uni prokaryotlar va boshqa quyi darajadagi eukariotlar oʻrniga sutemizuvchilar hujayralarida ishlatish mumkin.
- Shuningdek, mahsulot tozaligini oshiradi.
Shuning uchun, GFP bilan solishtirganda, EGFP gen ekspressiyasini o'rganish uchun afzal qilingan tanlovdir. Biroq, mahsulot GFPga nisbatan qimmatroq.
GFP va EGFP oʻrtasidagi oʻxshashliklar qanday?
- GFP va EGFP ikkita oqsil boʻlib, yashil rang chiqarish qobiliyatiga ega
- Shuning uchun ikkalasi ham gen ekspressiyasini oʻrganishda reportyor oqsil vazifasini bajaradi.
- Shuningdek, rekombinant DNK texnologiyasi yordamida ikkalasini ham sintez qilish mumkin.
- Bundan tashqari, takomillashtirilgan shakllarni sintez qilish uchun bu ikki turni yanada mutatsiyalash oson.
GFP va EGFP oʻrtasidagi farq nima?
Reportyor geni - bu rekombinant DNK texnologiyasiga qiziqish geniga bog'langan gen. Bu rekombinant vektorning xostga muvaffaqiyatli o'zgarishi haqida signal beradi. Bu erda GFP va EGFP ikki turdagi yashil floresan oqsillar bo'lib, ular reportyor oqsillari sifatida ishlaydi. Biroq, GFP va EGFP o'rtasidagi asosiy farq shundaki, GFP yovvoyi turdagi, EGFP esa GFPning ishlab chiqilgan versiyasidir. Bundan tashqari, EGFP GFPga qaraganda ko'proq foydali xususiyatlarga ega. Masalan, EGFP kuchli lyuminestsent nur hosil qiladi va GFPga qaraganda sezgirroq. GFP va EGFP o'rtasidagi yana bir farq biz ulardan foydalanishimiz mumkin bo'lgan tizimlardir. Sutemizuvchilar tizimi GFP, sutemizuvchilar tizimi esa EGFPdan foydalanadi.
Quyidagi infografikada GFP va EGFP oʻrtasidagi farq jadval koʻrinishida keltirilgan.
Xulosa – GFP va EGFP
GFP va EGFP molekulyar klonlash va gen ekspressiyasini o'rganishda reportyor oqsillardir. GFP - bu yashil floresan oqsil bo'lgan yovvoyi turdagi oqsil. Protein dastlab Aequorea victoria meduzasidan ajratilgan edi. Bundan farqli o'laroq, EFGP GFP oqsilining rivojlangan shaklidir. Bu yaxshilangan xususiyatlarga ega yovvoyi tipdagi mutant. Shunday qilib, EFGP yuqori signal kuchiga va yuqori sezuvchanlikka ega. Shuning uchun biz uni sutemizuvchilar vektorlarida ishlatishimiz mumkin. Bundan farqli o'laroq, GFPdan foydalanish asosan sutemizuvchilardan tashqari vektorlarda qo'llaniladi. Umuman olganda, bu GFP va EGFP o'rtasidagi farq.
