Asosiy farq – yigʻuvchi jel va ajratuvchi gel
SDS-PAGE texnikasini tushuntirishda stacking gel va ajratuvchi gel atamalaridan foydalaniladi. SDS-PAGE yoki natriy dodesil sulfat-poliakrilamid gel elektroforezi - bu oqsil molekulalarini molekulyar og'irliklari asosida ajratish uchun ishlatiladigan laboratoriya usuli. Texnikaning orqasidagi nazariya shundaki, turli molekulyar og'irliklarga ega bo'lgan oqsillar turli xil migratsiya tezligini ko'rsatadi; past molekulyar og'irlikdagi molekulalar tezroq ko'chib o'tadi, yuqori molekulyar og'irlikdagi molekulalar esa sekin. Migratsiya uchun vosita jeldir. Ikki turdagi jellar stacking gel va ajratuvchi gel deb nomlanadi. Stacking gel va separator gel o'rtasidagi asosiy farq shundaki, stacking gelning pH 6,8, ajratuvchi jelning pH qiymati esa 8,8.
Stacking Gel nima?
Stacking gel - bu SDS-PAGE texnikasida ko'proq konsentrlangan rezolyutsiya jeli (ajratish jeli) ustiga qo'yiladigan past konsentratsiyali poliakrilamid jel. Stacking gel elektroforez rezolyutsiyasini yaxshilash uchun ishlatiladi. Namunadagi oqsillarga ta'sir qiluvchi stacking gel va resolution gel kontsentratsiyasi o'rtasidagi farq tufayli o'lchamlari ortadi. Stacking gelidagi poliakrilamid kontsentratsiyasi past bo'lganligi sababli, gözenek hajmi kattaroqdir. Bu ajralishni oshirishga ham yordam beradi.
Stecking gel - taxminan 7% poliakrilamiddan iborat katta gözenekleri bo'lgan bo'sh poliakrilamid jel. Bu teshiklar katta oqsil molekulalari uchun sezilarli to'siq bo'lib xizmat qilmaydi. Demak, bu gel oqsillarning harakatchanligiga ozgina ta'sir qiladi. Bu oqsilning harakatchanligi va hajmiga qarab ularni ikkita jel o'rtasida to'plash orqali ajratishni amalga oshiradi.
01-rasm: SDS-PAGE Akrilamid Gel
Stecking gelining pH qiymati 6,8. Uning pH darajasi jelni 2 pH birligi bilan eritishdan ko'ra kislotali. Bu pH pastroq ion kuchini anglatadi, shuning uchun yuqori elektr qarshilik. Bu jelda mavjud bo'lgan boshqa zaryadlangan zarrachalarga qaraganda oqsillarning harakatchanligini qo'zg'atadi.
Ajratuvchi jel nima?
Separator jeli yoki SDS-PAGEtechnique rezolyutsiyasi jeli yuqori konsentratsiyali poliakrilamid jel boʻlib, past konsentratsiyali stacking gelning tepasiga joylashtiriladi. Ajratuvchi jelda yuqori miqdorda poliakrilamid (10%) mavjud. Ushbu gelning pH darajasi pH=8,8 sifatida saqlanadi, bu stacking gelnikidan yuqori pH darajasidir.
02-rasm: Jel elektroforez apparati
Oqsil molekulalari ajratuvchi jelga yetganda, bu molekulalarning migratsiyasi sekinlashadi, chunki ajratuvchi jel oqsil molekulalarining harakati uchun sezilarli to'siq bo'lib xizmat qilishi mumkin bo'lgan kichik gözenek o'lchamiga ega yuqori konsentratsiyali jeldir.. Bu sekinlashuv boshqa oqsillarning asta-sekin koʻchib oʻtishini taʼminlaydi, natijada ikkita jel oʻrtasida tor, konsentrlangan tasma hosil boʻladi.
Stecking gel va separator gel oʻrtasidagi bogʻliqlik qanday?
Stacking gel va separator gel bir xil qurilmada ishlatiladi
Stecking gel va separator gel oʻrtasidagi farq nima?
Stacking gel va ajratuvchi gel |
|
| Stacking gel - bu past konsentratsiyali poliakrilamid jel bo'lib, u SDS-PAGE texnikasida ko'proq konsentrlangan rezolyutsiya jeli (ajratish jeli) ustiga qo'yiladi. | Ajratish jeli yoki SDS-PAGE texnikasining rezolyutsiyasi jeli yuqori konsentratsiyali poliakrilamid jel boʻlib, u past konsentratsiyali stacking gelining tepasiga joylashtiriladi. |
| Joylashtirish | |
| Stacking gel erituvchi (ajratish) jelga joylashtiriladi. | Ajratish jeli gel elektroforezi uchun ishlatiladigan idishning pastki qismiga joylashtiriladi. |
| Konsentratsiya | |
| Stecking gel konsentratsiyasi yuqori. | Ajratuvchi jelning konsentratsiyasi past. |
| Poliakrilamid tarkibi | |
| Stacking gel tarkibida taxminan 7% poliakrilamid mavjud. | Ajratish jelida taxminan 10% poliakrilamid mavjud. |
| pH | |
| Stecking gelining pH qiymati 6,8. | Ajratuvchi jelning pH qiymati 8,8. |
| Gözenek hajmi | |
| Yigʻish jelida katta gözenekler mavjud. | Ajratuvchi jelda kichik gözenekler mavjud. |
| Rezolyutsiya | |
| Stacking gel yaxshi aniqlikni beradi. | Ajratish jeli yomon aniqlikni beradi. |
Xulosa – stacking gel va separator gel
Stecking gel va ajratuvchi gel - bu ma'lum bir namunadagi oqsil molekulalarini yaxshiroq ajratish uchun ishlatiladigan ikki turdagi poliakrilamid jeldir. Stacking gel va ajratuvchi jel o'rtasidagi farq shundaki, stacking gelning pH 6,8, ajratuvchi jelning pH qiymati esa 8,8.
