Asosiy farq – Phusion va Taq Polimeraz
DNK polimerazalari molekulyar biologiya texnikasida keng qo'llaniladigan fermentlar bo'lib, ular DNK replikatsiyasiga uchragan barcha organizmlarda ham mavjud. Ular replikatsiya jarayonida ishtirok etadigan asosiy polimerlashtiruvchi fermentlardir. DNK polimeraza DNK zanjirining bo'sh 3' uchiga nukleotidlarni qo'shishga qodir, bu esa yangi zanjirning kengayishiga olib keladi. Hozirgi vaqtda molekulyar biologiyaning kasalliklar diagnostikasi va sanoatda qo'llanilishi tufayli turli xil foydali xususiyatlarga ega polimerazalarni ishlab chiqarish muhim ahamiyatga ega. Bu usulning aniqligini oshiradi va uni tezroq texnikaga aylantiradi. Phusion va Taq polimeraza - bu maxsus molekulyar dasturlarda qo'llaniladigan ikkita tijoriy ishlab chiqarilgan termostabil polimeraza fermenti. Phusion Pyrococcus furiosusdan ajratilgan DNK polimeraza bo'lib, asosan sodiqlikni oshirish uchun klonlash tajribalarida qo'llaniladi. Taq DNK polimeraza polimeraza zanjiri reaktsiyasida (PCR) ishlatiladigan standart DNK polimeraza bo'lib, u termostabil bakteriyadan ajratilgan; Termus aquaticus. Ikki ferment o'rtasidagi asosiy farq manba mikroorganizmidir. Phusion ekstremofil Pyrococcus furiosusdan, Taq polimeraza esa termofil Thermus aquaticusdan ajratilgan.
Phusion nima?
Phusion DNK polimeraza - bu ekstremofil arxeya bo'lgan Pyrococcus furiosus fermentini ajratib olish yo'li bilan ishlab chiqarilgan yangi polimeraza. Bu mikroblar juda yuqori harorat sharoitida yashaydi va shu bilan polimeraza yuqori issiqlikka chidamli polimeraza hosil qiladi. Fuzion polimeraza an'anaviy termostabil polimeraza nisbatan o'ta ishonchlilikni olish uchun ishlatiladi; Taq polimeraza. Fuzion polimeraza genomik DNKning 7,5 kb gacha bo'lgan uzun shablonlarini kuchaytirishga qodir. Phusion polimerazasining optimal polimerizatsiya quvvati 720 C da. Phusion, shuningdek, mahsulotlarni klonlashda ketma-ketlik, ifoda tahlili va mutatsiya tahlili uchun ishlatiladi.
Phusion DNK polimerazasi 3' - 5' ekzonukleaza faolligiga ega. Bu sintezdan keyin yangi sintezlangan ipni tekshirish imkonini beradi. Shunday qilib, nukleotidlarning mos kelmasligi osongina tuzatiladi. Shunday qilib, u kamroq xato darajasiga ega. Phusion polimerazasining umumiy afzalliklari:
- Haddan tashqari sodiqlik
- Yuqori tezlik va qisqartirilgan uzaytirish vaqti
- Rubst Reactions va minimal optimallashtirishni talab qiladi
- Yuqori rentabellik
01-rasm: Phusion
Fuzion polimerazasining asosiy kamchiligi shundaki, u deoksiuridin trifosfat (dUTP) ishtirokida inhibe qilinadi. Reaksiya aralashmasida dUTPlar to'plangan bo'lsa, u Phusion polimeraza ta'sirini inhibe qilishi mumkin. Bu fermentni qo'shishdan oldin reaksiya aralashmasini dUTPase bilan davolash orqali oldini oladi. Hozirgi vaqtda bu muammoni hal qilish uchun Phusion polimeraza o'rniga Pfu Turbo deb nomlanuvchi Phusion polimerazasining dUTPga chidamli varianti qo'llanilmoqda.
Taq polimeraza nima?
Taq DNK polimeraza ixtirosi molekulyar biologiya sohasida inqilob qildi. Bu DNKni kuchaytirishda katta muammoni hal qildi. Taq DNK polimeraza termofil Thermus aquaticus bakteriyasidan ajratib olingan va ajratilgan issiqlik barqaror polimeraza fermentidir. Ushbu fermentlarning kashf etilishi PCRning rivojlanishiga olib keladi. Ushbu ferment an'anaviy mashaqqatli klonlash usullari o'rniga DNKni kuchaytirishda polimeraza zanjiri reaktsiyasidan foydalanishga imkon berdi. PCR endi molekulyar diagnostika, qishloq xo'jaligi va sanoat sohalarida qo'llaniladi, bu texnikaga ko'plab yangi o'zgarishlar qo'shilgan.
02-rasm: Taq polimeraza
Taq DNK polimeraza 720C – 800C orasidagi optimal harorat oralig'ida ishlaydi. Taq DNK polimeraza ko-faktorni talab qiladi; funktsiyasi uchun magniy. Taq polimeraza 3' – 5' ni o'qish qobiliyatiga ega emas, shuning uchun Taq DNK polimerazasining xatolik darajasi DNK polimerazalarining yangi turlari, masalan, Phusion polimeraza va boshqalar bilan solishtirganda yuqori. Biroq, Taq DNK polimerazasining mashhurligi saqlanib qoladi Fermentning qulayligi va moslashuvchanligi tufayli ilm-fan dunyosida bir xil.
Fusion va Taq polimeraza o'rtasidagi o'xshashliklar qanday?
- Phusion va Taq polimeraza fermentlari DNK zanjirining 3' erkin uchiga nukleotidlar qo'shishga qodir bo'lgan polimerizatsiya qiluvchi fermentlardir.
- Phusion va Taq polimerazalari polimerizatsiyani boshlash uchun primer ketma-ketligini talab qiladi.
- Phusion va Taq polimerazalari issiqlikka chidamli.
- Phusion va Taq polimerazalari PCR mexanizmlarida DNKni kuchaytirish uchun ishlatiladi.
- Reaksiya aralashmasiga polimeraza qoʻshganda, ferment samaradorligini taʼminlash uchun Phusion va Taq polimerazalari oxirgi qoʻshiladi.
- Phusion va Taq polimerazalari molekulyar biologiya eksperimental maqsadlarda tijorat maqsadida sintezlanadi.
- Phusion va Taq polimerazalari funksiyasini bajarish uchun kofaktor talab qiladi.
Fusion va Taq Polimeraza o'rtasidagi farq nima?
Phusion va Taq Polimeraz |
|
| Phusion Pyrococcus furiosusdan ajratilgan DNK polimeraza boʻlib, ishonchlilikni oshirish uchun asosan klonlash tajribalarida qoʻllaniladi. | Taq DNK polimeraza polimeraza zanjiri reaksiyasida (PCR) ishlatiladigan standart DNK polimeraza boʻlib, termostabil bakteriya, Thermus aquaticusdan ajratilgan. |
| Manba organizm | |
| Phusion ekstremofil arxeyadan olingan - Pyrococcus furiosus. | Bu adabiy asarlar mustamlakachilik davridan mustamlakachilik davrigacha boʻlgan davrni qamrab oladi. |
| Tasdiqlash qobiliyati | |
| 3’ – 5’ isbot oʻqish qobiliyati Phusionda mavjud. | 3’ – 5’ proof o’qish qobiliyati Taq polimerazasida yo’q. |
| Fidelity | |
| Phusion bilan yuqori aniqlik mavjud. | Taq polimeraza aniqligi past. |
| Amplifikasyon | |
| Phusion uzoq DNK fragmentlarini kuchaytirishga qodir. | Taq polimeraza ancha qisqaroq DNK fragmentlarini kuchaytirishga qodir. |
| dUTP bilan zaharlanish | |
| Phusion ta'siri toq to'planishi bilan inhibe qilinadi. | Taq polimeraza dUPT tomonidan inhibe qilinmaydi. |
Xulosa – Phusion va Taq polimeraza
Phusion va Taq DNK polimerazalari PCR texnikasida ishlatiladigan ikkita issiqlikka bardoshli polimerazadir. Phusion - bu ekstremofil Pyrococcus furiosusdan ajratilgan polimeraza, Taq esa termostabil bakteriyalar Thermus aquaticusdan ajratilgan. Taq DNK polimeraza kashfiyoti PCR ixtirosiga olib keladi. Phusion Taqga nisbatan juda ko'p afzalliklarga ega, bu Phusionni yuqori aniqlikdagi DNK ishlab chiqarishda eng yaxshi variantga aylantirdi. Biroq, Taq polimeraza hali ham PCRda standart polimeraza fermenti sifatida ishlatiladi. Bu Phusion va Taq polimeraza o'rtasidagi farq.
