Klenow va T4 DNK polimeraza o'rtasidagi asosiy farq shundaki, Klenow fragmenti E. coli DNK polimeraza 1 ning katta qismi, T4 DNK polimeraza esa T4 bakteriofagining DNK polimeraza 1 dir.
DNK polimerazalari avvaldan mavjud boʻlgan primerning 3′-OH uchiga deoksiribonukleotidlarni qoʻshib DNK hosil boʻlishini katalizlovchi fermentlardir. DNK polimerazalarining har xil turlari mavjud. Molekulyar biologiyada ishlatiladigan ko'pchilik DNK polimerazalari prokaryotik DNK polimerazalaridir. Klenow fragmenti va T4 DNK polimeraza prokaryotik kelib chiqishi bo'lgan DNK polimerazalarining ikki turidir. Klenow fragmenti E.ning parchalanishidan hosil bo'lgan katta bo'lakdir.coli DNK polimeraza 1 ni bakterial proteaz subtilisin tomonidan ikki bo'lakka bo'ladi. T4 DNK polimeraza T4 bakteriofagining DNK polimeraza 1 dir. Klenow va T4 DNK polimerazalari 5′→3′ polimeraza va 3′→5′ eksonukleaza faolligiga ega. Ularning ikkalasida ham 5′→3′ eksonukleaza faolligi yoʻq, bu ularni molekulyar biologiyadagi koʻplab ilovalar uchun qulayroq qiladi.
Klenow nima?
Klenow fragmenti molekulyar biologiyada foydali bo'lgan DNK polimerazadir. E. coli DNK polimeraza 1 bakterial proteaz, subtilisin tomonidan proteolitik hazm bo'lganda, ikkita bo'lak hosil bo'ladi: biri katta bo'lak, ikkinchisi esa kichik bo'lak. Klenow fragmenti 68 kDa o'lchamdagi katta bo'lakdir. Klenow fragmenti DNK Pol I ning 5′→3′ polimeraza va 3′→5′ eksonukleaza (tekshiruv) faolligiga ega. Klenow fragmentining 3′→5′ eksonukleaza faolligi polimerlanish jarayonida noto'g'ri qo'shilgan asoslarni olib tashlashni osonlashtiradi. Klenow fragmentida 5'→3' eksonukleaza faolligi mavjud emas, bu to'liq uzunlikdagi yoki buzilmagan E.coli DNK polimeraza 1. Faqat polimerizatsiya faolligi kerak bo'lganda foydalidir. Klenow fragmentlari 5' o'simtalarni to'ldirish, zondlar sintezi, DNKni ketma-ketlashtirish, ikki zanjirli DNK sintezi, cDNK ikkinchi zanjiri sintezi va saytga yo'n altirilgan mutagenez uchun ishlatiladi.
01-rasm: Klenow fragmenti
Ba'zi ilovalarda Klenow fragmentining 3'→5' eksonukleaza faolligi ham istalmagan bo'ladi. Uni Klenow fragmentini kodlaydigan genga mutatsiya kiritish orqali olib tashlash mumkin. Olingan Klenow fragmenti ekzo-Klenow fragmenti sifatida tanilgan. Shuning uchun ekzo-Klenow fragmenti E. coli polimeraza 1 ning faqat 5'→3' polimeraza faolligiga ega.
T4 DNK polimeraza nima?
T4 DNK polimeraza DNK sintezini katalizlovchi DNK polimerazadir. Bu bakteriofag T4 tomonidan kodlangan protein. Strukturaviy ravishda T4 DNK polimeraza 898 aminokislota qoldig'i oqsilidir (molekulyar og'irligi 103,6 kDa). Sintezni katalizlash uchun shablon va primer kerak.
02-rasm: T4 DNK polimeraza
Klenow fragmentiga oʻxshab, T4 DNK polimeraza ham 5′→3′ polimeraza, ham 3′→5′ eksonukleaza faolligiga ega. Bundan tashqari, u 5'→3' ekzonukleaza faolligiga ega emas. T4 DNK polimeraza DNK bo'laklarining 5'-chiqadigan uchlarini to'ldirishda foydalidir. Bundan tashqari, u ko'pincha ikki zanjirli DNKning 5'-oxiri yoki 3'-oxirini belgilash uchun ishlatiladi. T4 DNK polimeraza ko'pincha to'mtoq klonlashda qo'llaniladi. T4 DNK polimerazasining 3'→5' eksonukleaza (tekshirish) faolligi Klenow fragmentiga qaraganda kuchliroq (200 martadan ortiq). Eng muhimi, T4 DNK polimeraza yuqori jarayonga ega (sekundiga 400 nukleotid).
Klenow va T4 DNK polimeraza o'rtasidagi o'xshashliklar qanday?
- Klenow va T4 DNK polimeraza ikkita prokaryotik polimerazadir.
- Ikkala polimeraza 5′→3′ polimeraza va 3′→5′ eksonukleaza faolligiga ega.
- Ular 5′→3′ eksonukleaza faolligini koʻrsatmaydi.
- Ikkala ferment ham DNK sintezini katalizlash uchun shablon va primer talab qiladi.
- Bu fermentlarni 75 haroratda issiqlik bilan faolsizlantirish mumkin 0
Klenow va T4 DNK polimeraza o'rtasidagi farq nima?
Klenow va T4 DNK polimeraza o'rtasidagi asosiy farq har bir fermentning kelib chiqishidir. Klenow fragmenti bakteriyadan, T4 DNK polimeraza esa virus bo'lgan bakteriofagdan kelib chiqqan. T4 DNK polimeraza Klenow fragmentiga qaraganda yuqori qayta ishlash qobiliyatiga ega. Bundan tashqari, T4 DNK polimeraza Klenow fragmentiga qaraganda kuchli o'qish faolligiga ega. Shunday qilib, bu Klenow va T4 DNK polimeraza o'rtasidagi yana bir farq.
Quyidagi info-grafikada Klenow va T4 DNK polimeraza oʻrtasidagi koʻproq farqlar jadval koʻrinishida keltirilgan.
Xulosa – Klenow va T4 DNK polimeraza
Klenow fragmenti E. coli DNK polimeraza 1 ning katta fragmentidir. U faqat 5′→3′ polimeraza va 3′→5′ eksonukleaza faolligiga ega. Unda buzilmagan E. coli DNK pol 1 ning 5'→3' eksonukleaza faolligi yo'q. Shuning uchun Klenow fragmenti bakterial polimerazadir. Boshqa tomondan, T4 DNK polimeraza T4 bakteriofag tomonidan kodlangan polimerazadir. Klenow fragmentiga o'xshab, u ham 5'→3' polimeraza, ham 3'→5' ekzonukleaza faolligini o'z ichiga oladi va 5'→3' ekzonukleaza faolligiga ega emas. Biroq, T4 DNK polimeraza Klenow fragmentiga qaraganda yuqori ishlov berish qobiliyatiga va yuqori o'qish faolligiga ega. Demak, bu Klenow va T4 DNK polimeraza o'rtasidagi asosiy farq.
