Transformatsiya va transfeksiya
Transformatsiya va transfeksiya mezbon hujayraga begona genni kiritish uchun ishlatiladigan ikkita oddiy usuldir. Biroq, bu usullar xost yoki vektor tizimlarining turiga bog'liq.
Hujayra transformatsiyasi nima?
Transformatsiya - bu xamirturush va bakteriya hujayralariga genlarni kiritish uchun qo'llaniladigan usul. Ushbu usul odatda genlarda irsiy o'zgarishlarga olib keladi va shuning uchun genning ifodasi doimiydir. Bakterial transformatsiya birinchi marta 1928 yilda Frederik Griffit tomonidan kiritilgan. Keyin 1970-yillarning boshlarida bu usul E.coli. E. coli transformatsiyasi jarayonida hujayralar CaCl2 ning muzdek sovuq eritmasiga botiriladi. Bu qadam E.coli hujayralarini malakali qiladi. Shundan so'ng, vakolatli hujayralar plazmid DNK bilan aralashtiriladi va 20-30 daqiqa davomida muz ustida inkubatsiya qilinadi. Keyin DNKni hujayraga o'tkazishni ta'minlash uchun qisqa issiqlik zarbasi beriladi. Nihoyat, hujayralar ozuqaviy bulonga joylashtiriladi va plazmidlarni o'rnatish uchun 37 ° C da 60-90 daqiqa davomida inkubatsiya qilinadi. Ushbu bosqichlar muvaffaqiyatli bajarilgandan so'ng, o'zgartirilgan hujayralar hujayralarni ko'paytirish uchun mos muhitga joylashtirilishi mumkin. Transformatsiya samarasiz usul hisoblangani uchun uni klon banklarini tayyorlash uchun ishlatib bo'lmaydi.
Hujayra transfeksiyasi nima?
Transfeksiya - bu odatda sutemizuvchilar hujayralariga begona genni kiritish usuli. Transfeksiyaning ikkita usuli mavjud; ya'ni vaqtinchalik transfeksiya va barqaror transfeksiya. Vaqtinchalik transfeksiyada gen ifodasi cheklangan vaqt uchun mavjud; Shunday qilib, genning o'zgarishi vaqtinchalik ifodani keltirib chiqaradi. Ushbu transfeksiya usuli oddiy va tezdir; shuning uchun uni muntazam ravishda ishlatish mumkin. Vaqtinchalik transfeksiyaning kamchiliklaridan biri bu katta miqyosdagi oqsil sintezi tizimlari uchun qo'llash qiyinligi.
Barqaror transfeksiya vaqtida maqsadli gen xost hujayrasi genomiga integratsiya qilinadi va shu tariqa gen ekspressiyasi vaqtinchalik transfeksiyadan farqli ravishda doimiy boʻladi.
Transformatsiya va Transfeksiya oʻrtasidagi farq nima?
• Transformatsiya - bu genning prokaryotik hujayraga (bakterial va xamirturush) kiritilishi, transfeksiya esa odatda genning sutemizuvchilar hujayrasiga kiritilishi deb ataladi.
• Transformatsiya genlarning irsiy oʻzgarishiga olib keladi, transfeksiya esa genlarda vaqtinchalik yoki doimiy oʻzgarishlarga olib kelishi mumkin.
