Asosiy farq – Issiq va sovuq Tripsizatsiya
Iliq va sovuq tripsinizatsiya hayvonlar hujayralarini etishtirishda hujayralarni fermentativ parchalashda qoʻllaniladigan ikkita usuldir. Issiq va sovuq tripsinatsiya o'rtasidagi asosiy farq, nomlardan ko'rinib turibdiki, tripsin hujayralarni parchalash uchun qo'shilgan haroratga bog'liq. Issiq tripsinizatsiya yuqori harorat sharoitida (36,5 – 37 0C) amalga oshiriladi, sovuq tripsinizatsiya esa past harorat sharoitida amalga oshiriladi.
Hayvon hujayralarini birlamchi hujayra oʻstirish jarayonida uchta asosiy usul qoʻllaniladi va ular oʻzini muvaffaqiyatli isbotladi. Uchta usul hujayralarni mexanik parchalash, hujayralarni fermentativ parchalash va asosiy eksplantatsiya texnikasini o'z ichiga oladi. Hujayralarning fermentativ parchalanishi hujayralarni izolyatsiyasiga olib keladi va bu proteinni parchalovchi ferment tripsin tomonidan amalga oshiriladi. Shuning uchun bu jarayon tripsinizatsiya deb nomlanadi. Tripsizlanish ikki xil sharoitda amalga oshirilishi mumkin, ya'ni issiq va sovuq tripsinizatsiya. Issiq tripsinatsiya - bu hujayralarni tripsin bilan iliq sharoitda 36,5 - 37 0C haroratda davolash usuli. Sovuq tripsinatsiya - bu tripsin bilan ishlov berish jarayoni bo'lib, u sovuqroq sharoitda, yaxshisi, juda past haroratlarda muzda amalga oshiriladi.
Iliq Tripsinizatsiya nima?
Birlamchi hujayra madaniyatini hosil qilish uchun hujayralarni ajratish uchun hujayra komponentlarini ajratish uchun tripsinizatsiya qilish mumkin. Tripsin oqsillarni parchalash fermenti bo'lib, tripsinlashda ishlatiladigan ferment aralashmasi xom ekstrakt yoki tozalangan mahsulot bo'lishi mumkin. Xom ekstrakt oqsil parchalanishi va hujayra parchalanishida samaraliroq ekanligi aytiladi, chunki uning tarkibida boshqa parchalanuvchi fermentlar mavjud.
Iliq tripsinlash yuqori harorat sharoitida sodir boʻladigan hujayralarni parchalash uchun eng koʻp qoʻllaniladigan enzimatik usuldir. Tripsinatsiya bilan davolashdan oldin kerakli to'qimalar kichikroq bo'laklarga bo'linadi. Bu oson ajratish jarayonini osonlashtiradi. Keyin tug'ralgan to'qima Dissection Bazal Tuz muhiti deb nomlanuvchi maxsus muhitda yuviladi.
Yuvish bosqichi tugagach, hujayralar tripsin bo'lgan faol fermenti bo'lgan kolbaga aylanadi. Bu usul iliq tripsinizizatsiya protokolini nazarda tutganligi sababli tripsin taxminan 37 0C atrofida toʻrt soat davomida joylashtiriladi.
01-rasm: tripsin
Tarkibi protokol qulayligi va parchalanish jarayonini tezlashtirish uchun santrifüj usullari yordamida aralashtiriladi va aralashtiriladi. Tavsiya etilgan vaqtga erishilgandan so'ng, hujayralar supernatantdan olinishi mumkin. Keyin supernatantdan olingan hujayralar ma'lum bir harorat va vaqtda inkubatsiya qilinadi.
Sovuq Tripsinizatsiya nima?
Sovuq tripsinizlanish sovuq sharoitda amalga oshiriladigan tripsinizatsiyaning boshqa turidir. Ushbu texnikada maydalangan va yuvilgan hujayralar muz ustida flakonlarga joylashtiriladi va keyin tripsin bilan namlanadi. Cho'milish muddati ancha uzoqroq – taxminan 6 – 24 soat.
Sirish jarayoni tugagandan so'ng, tripsin hujayra lizatidan chiqariladi va to'qima bo'laklari 37 0C da taxminan 20-30 daqiqa davomida inkubatsiya qilinadi. Hujayralarning parchalanishi to'qimalar aralashmasini takroriy pipetlash orqali amalga oshiriladi. Bu hujayralarning membranadan ajralib chiqishiga va supernatantga kelishiga imkon beradi. Hujayralar supernatantga tushgandan so'ng, ular inkubatsiya qilinadi va istalgan harorat va vaqt oralig'ida o'stiriladi.
Sovuq tripsinizlash usuli bir qancha afzalliklarga ega
- Hujayraning shikastlanishi minimallashtirilganligi sababli yashovchan hujayralarning yuqori mahsuldorligi. Santrifüj bosqichlarini ishlatmaslik orqali hujayra shikastlanishi minimallashtiriladi.
- Juda qulay usul.
- Kamroq mehnat talab qiladi.
Sovuq tripsinizlash usulining asosiy cheklovi shundaki, bir misolda katta miqdorda ishlatib boʻlmaydi.
Iliq va sovuq tripsinizatsiya oʻrtasidagi oʻxshashliklar qanday?
- Iliq va sovuq Tripsizlanish jarayonlari hujayralarni parchalash uchun tripsin fermentidan foydalanadi.
- Hujayralarni ajratish uchun hujayra madaniyati protseduralarida issiq va sovuq Tripsizlanish jarayonlari qo'llaniladi.
- Iliq va sovuq Tripsizatsiya bilan davolash muolajalarida hujayralar supernatantdan olinadi.
Iliq va sovuq tripsinizatsiya oʻrtasidagi farq nima?
Iliq va sovuq Tripsizatsiya |
|
| Iliq tripsinlash - bu hujayralarni tripsin bilan iliq sharoitda 36,5 – 37 haroratda davolash usuli 0. | Sovuq tripsinlash - bu tripsin bilan ishlov berish jarayoni boʻlib, sovuqroq sharoitda, yaxshisi, juda past haroratda muzda amalga oshiriladi. |
| Protokol | |
| Toʻgʻralgan toʻqima boʻlaklari protsedura davomida doimiy ravishda 37 0C da saqlanadi. | Toʻgʻralgan toʻqima boʻlaklari dastlab muzdek sovuq haroratda saqlanadi, soʻngra 37 0 da saqlanadi. |
| Harorat | |
| Iliq tripsinizlanish 36.5 – 37 da sodir boʻladi 0 | Sovuq tripsinizlanish muzli sovuq haroratlarda sodir boʻladi. |
| Sarflangan vaqt | |
| Iliq tripsinizing butun jarayoni (taxminan 4 soat) uchun kamroq vaqt talab etiladi. | Sovuq tripsinizatsiya uchun uzoqroq vaqt talab qilinadi (taxminan 6 – 24 soat). |
| Hayotiy hujayralar hosili | |
| Iliq tripsinizatsiya past. | Yuqori sovuq tripsinizatsiya. |
| Santrifüjdan foydalanish | |
| Iliq tripsinizatsiyada hujayralarni parchalash uchun sentrifugalash kerak. | Sovuq tripsinlashda santrifüjlash shart emas. |
| Tripsinatsiya uchun dastlabki toʻqimalar miqdori | |
| Iliq tripsinizatsiyada koʻproq miqdorda toʻqimalardan foydalanish mumkin. | Sovuq tripsinizatsiyada kamroq miqdordagi toʻqimalardan foydalanish mumkin. |
| Hujayra shikastlanishi | |
| Iliq tripsinizatsiyada santrifüjlash tufayli yuqori. | Sovuq tripsinizatsiya tufayli kamroq. |
Xulosa – Issiq va sovuq Tripsizatsiya
Tripsinizatsiya - bu hujayrani o'stirish jarayonida birlamchi hujayra madaniyatini ajratish va tayyorlash uchun oqsilni parchalovchi tripsin fermentidan foydalanish usuli. Jarayon davomida ishlatiladigan haroratga asoslangan tripsinizatsiyaning ikkita asosiy usuli mavjud. Ular issiq va sovuq tripsinizatsiyadir. Issiq tripsinizizatsiya 37 0C da amalga oshiriladi, sovuq tripsinizatsiya esa muzdek sovuq sharoitda amalga oshiriladi. Sovuq tripsinizatsiyaning tugashi ko'proq vaqt talab qilsa-da, uning hayotiy hujayralarning yuqori hosildorligi aytiladi. Buning sababi shundaki, sovuq tripsinizatsiyada hujayra shikastlanishi minimallashtiriladi, chunki u kuchli sentrifugalash bosqichlarini ishlatmaydi. Bu issiq va sovuq tripsinizatsiya o'rtasidagi farq.
