Asosiy farq – T4 va T7 DNK ligasi
DNK ligaza molekulyar biologiya texnikasida ishlatiladigan muhim fermentdir. U nukleotidlar o'rtasida fosfodiester aloqalarini hosil qilish orqali nukleotidlarni birlashtirish uchun molekulyar elim vazifasini bajaradi. Fosfodiester bog'lari shakar qismining 3' gidroksil uchi va 5' uchi fosfat guruhi o'rtasida hosil bo'ladi. DNK ligaza replikatsiya jarayonida orqada qolgan ipning Okazaki bo'laklariga qo'shilishda va DNKni tiklash mexanizmlari va in vitro klonlash tajribalarida vektor genomiga qiziquvchi kerakli genga qo'shilish uchun juda muhimdir. Hozirgi vaqtda molekulyar biologlar tomonidan qo'llaniladigan ikkita asosiy DNK ligazalari mavjud: T4 va T7 DNK ligazalari. T4 DNK ligaza T4 bakteriofagidan ajratilgan birinchi fermentlardan biridir. Kichikroq protein bo'lgan T7 DNK ligaza T7 bakteriofagidan ajratilgan fermentdir. Bu T4 va T7 DNK ligazalari orasidagi asosiy farq.
DNK ligazasining harakati nima?
DNK ligatsiyasi uch bosqichli reaktsiyada sodir bo'ladi. Birinchi qadam ATP ning alfa-fosforiga nukleofil hujum bo'lib, kovalent ferment-adenilat oraliq mahsulotini hosil qiladi, bunda AMP lizinning terminal yon zanjiri azotiga bog'lanadi. Ikkinchi bosqichda 5'-fosfat bilan tugaydigan DNK substrati tomonidan ferment-adenilatning fosforiga nukleofil hujum sodir bo'lib, lizinni chiqaradi va DNK-adenilat hosil qiladi. Oxirgi bosqichda DNK-adenilatga boshqa DNK zanjirining 3'-OH si hujum qiladi, AMP ni chiqaradi va polinukleotidlarga qo'shiladi.
T4 DNK Ligaza nima?
T4 Ligaza Meselson, Weigle va Kellenberger tomonidan ajratilgan va aniqlangan birinchi ligaza bo'lib, ishlab chiqarilgan birinchi tijorat ligaza edi. T4 DNK ligazasi ATPga bog'liq bo'lgan ferment bo'lib, fosfodiester bog'lanishini katalizlaydi. Bu 487 aminokislota qoldig'iga ega bo'lgan yagona polipeptid zanjiri va molekulyar og'irligi taxminan 77 kDa. Uning faolligi uchun optimal pH 7,5 – 8 oralig'ida.
01-rasm: T4 DNK ligaza
T4 DNK Ligaza, uning nomidan ko'rinib turibdiki, T4 bakteriofagida mavjud bo'lib, E. coli bilan infektsiyalanganida fag ferment ishlab chiqarganida ajratilgan. Ferment ikki zanjirli DNK duplekslarini to'mtoq uchlari bilan bog'laydi va bog'lanadigan bo'laklar bir-biriga yaqin bo'lishi kerak.
T7 DNK Ligaza nima?
T7 ligaza T7 bakteriofag tomonidan ishlab chiqarilgan 41 kDa protein bo'lib, E. coli hujayralarini infektsiyalash orqali ajratiladi. T7 ligazasining asosiy vazifasi fosfodiester bog'lanishlari orqali DNK duplekslarini bog'lash va klonlash tajribalarida DNKning yaqin qismlarini birlashtirishdir. T7 DNK ligazasi uchun optimal pH 7,0 - 7,2 oralig'ida yotadi. T7 ligaza ATPga bog'liq. T7 DNK ligazalari, shuningdek, DNK va RNK duragaylarini yumshatishga qodir, bu esa transkripsiya paytida g'ayritabiiy konformatsiyalarni keltirib chiqaradi; ammo, bu hodisa hali ham in vitro tadqiqotlari ostida.
T4 va T7 DNK ligazalari oʻrtasidagi oʻxshashliklar qanday?
- T4 va T7 DNK Ligaza DNK fragmentining 3' OH uchi va 5' fosfat uchi o'rtasida fosfodiester bog'lanish hosil bo'lishi orqali DNK duplekslarini yumshatish orqali bog'lanish reaktsiyasida ishtirok etadi.
- Ikkala ferment ham bir-biriga yaqin joylashgan toʻmtoq uchli DNK duplekslarini bogʻlaydi.
- Har ikkala ferment ham ATPga bog'liq.
- Bu fermentlar E. coli hujayralarini maxsus bakteriofag bilan yuqtirish orqali ajratiladi.
- Har ikkala fermentning qoʻllanilishiga quyidagilar kiradi:
- Molekulyar klonlash - vektorga qiziqish genini bog'lash uchun
- DNK ta'miri - ikki zanjirli bo'shliqlarni tuzatish uchun
- In vitro DNK replikatsiyasi
- Ligaza zanjiri reaktsiyasi
T4 va T7 DNK ligazalari oʻrtasidagi farq nima?
T4 va T7 DNK ligasi |
|
| T4 DNK ligaza turi DNK ligaza T4 bakteriofagidan ajratilgan va fosfodiester bogʻlanishi orqali qoʻshni DNK fragmentlarini bogʻlashda ishtirok etadi. | T7 DNK Ligaza turi DNK ligaza T7 bakteriofagidan ajratilgan va fosfodiester bogʻlanishi orqali qoʻshni DNK fragmentlarini bogʻlashda ishtirok etadi. |
| Oqsil hajmi | |
| T4 DNK ligazasining oʻlchami 77 kDa – T7 DNK ligazasidan kattaroq. | T7 DNK ligazasining hajmi 41 kDa. |
| Optimal pH | |
| T4 DNK ligaza bilan ishlaydigan pH diapazoni 7,5 – 8,0. | T7 DNK ligazasi bilan ishlaydigan pH diapazoni 7,0 – 7,2. |
Xulosa – T4 va T7 DNK ligasi
DNK ligazalari qiziqish genini o'z ichiga olgan rekombinant DNK molekulalarini ishlab chiqarish uchun molekulyar klonlashda ishtirok etadigan muhim fermentlar sinfidir. Ligatsiya reaktsiyasi energiyadan foydalanadigan reaktsiya bo'lib, mavjud ligazalarni modulyatsiya qilish orqali aniqlikni oshirish uchun yangi tadqiqot ishlari olib borilmoqda. T4 va T7 DNK ligazalari molekulyar biologik texnikada ishlatiladigan muhim DNK ligaza fermentlarining ikki turidir. T7 DNK ligaza ham T4 bilan kasallangan E. coli dan ajratilgan birlamchi ligazaga asoslangan tadqiqot natijasidir. T7 kichik o'lchamlari tufayli o'z vazifasini bajarishda ko'proq samaradorlik va aniqlik bilan tasvirlangan. Bu T4 va T7 ligazalari o'rtasidagi farq.
T4 va T7 DNK Ligase ning PDF versiyasini yuklab oling
Siz ushbu maqolaning PDF-versiyasini yuklab olishingiz va iqtibos keltirgan holda oflayn maqsadlarda foydalanishingiz mumkin. Iltimos, PDF versiyasini bu yerdan yuklab oling T4 va T7 Ligase o'rtasidagi farq.
