Asosiy farq – Nick Translation va Primer kengaytmasi
Nik tarjimasi va primer kengaytmasi molekulyar biologiyada bajariladigan ikkita muhim texnikadir. Nikni tarjima qilish va primer kengaytmasi o'rtasidagi asosiy farq shundaki, nikni tarjima qilish jarayoni boshqa gibridizatsiya usullari uchun etiketli zondlarni ishlab chiqaradi, primerni kengaytirish usuli esa aralashmadan ma'lum bir RNK ketma-ketligini aniqlaydi va mRNKning ifodasi haqidagi ma'lumotlarni ochib beradi. Ikkala usul ham katta ahamiyatga ega va ular molekulyar tadqiqot laboratoriyalarida muntazam ravishda amalga oshiriladi.
Nik tarjimasi nima?
Nik tarjimasi turli molekulyar biologik texnikalar uchun yorliqli zondlarni tayyorlashda qoʻllaniladigan muhim usul boʻlib, blotting, in situ gibridizatsiya, floresan in situ duragaylash va hokazo. Bu DNK markirovkasining in vitro usulidir. DNK problari ma'lum DNK yoki RNK ketma-ketligini aniqlash uchun ishlatiladi. Belgilangan zond yordamida nuklein kislotaning murakkab aralashmasidan ma'lum bo'laklarni belgilash yoki ko'rish mumkin. Shuning uchun, etiketli problar turli texnikalar uchun ishlatiladigan turli xil texnikalar yordamida tayyorlanadi. Nik tarjimasi DNase 1 va DNK polimeraza 1 fermentlari yordamida etiketli zondlarni ishlab chiqaradigan shunday usullardan biridir.
Niklarni tarjima qilish jarayoni DNase 1 fermenti faolligi bilan boshlanadi. DNase 1 nukleotidlar orasidagi fosfodiester aloqalarini uzib, ikki zanjirli DNKning fosfat magistraliga niklarni kiritadi. Nik yaratilgach, nukleotidning erkin 3' OH guruhi hosil bo'ladi va unga DNK polimeraza 1 fermenti ta'sir qiladi. DNK polimeraza 1 ning 5' dan 3' gacha bo'lgan ekzonukleaza faolligi nukleotidlarni nikdan DNK zanjirining 3' yo'nalishiga qarab olib tashlaydi. Bir vaqtning o'zida DNK polimeraza 1 fermentining polimeraza faolligi ishlaydi va olib tashlangan nukleotidlarni almashtirish uchun nukleotidlarni qo'shadi. Agar nukleotidlar etiketlangan bo'lsa, almashtirish belgilangan nukleotidlar bilan sodir bo'ladi va u identifikatsiya qilish uchun DNKni belgilaydi. Bu yangi sintez qilingan etiketli DNK molekulyar biologiyada turli gibridlanish reaksiyalarida zond sifatida ishlatilishi mumkin.
01-rasm: Nikni tarjima qilish jarayoni
Primer kengaytmasi nima?
Primer kengaytmasi - bu RNK aralashmasidan ma'lum RNK ketma-ketligini topish va mRNK transkriptining 5' uchini topish uchun ishlatiladigan usul. Bundan tashqari, u RNK tuzilishi va ekspressiyasini o'rganish uchun ishlatiladi. Primer kengaytirish usuli etiketli primerlar yoki etiketli nukleotidlar bilan amalga oshiriladi. Belgilangan primerlar ishlatilsa, u cDNK sintezi uchun ishlatiladigan nukleotidlarni belgilash zaruriyatini istisno qiladi. Ushbu texnikada bir necha bosqichlar mavjud. Bu namunadan RNKni ajratib olish bilan boshlanadi. Keyin aralashmaga ma'lum bir RNK ketma-ketligining cDNKsini sintez qilish uchun kerakli ingredientlar bilan etiketlangan oligonükleotid primeri qo'shiladi. Aralashmaning qo'shimcha ketma-ketligi bilan primer tavlanadi. Shablon sifatida primer tavlangan ketma-ketlikni ishlatib, teskari transkriptaza fermenti RNK ketma-ketligining to'ldiruvchi DNKsini (cDNK) sintez qiladi. Primerni yumshatish va teskari transkripsiya faqat namunada o'ziga xos RNK ketma-ketligi mavjud bo'lganda sodir bo'ladi. Nihoyat, denaturatsiya qiluvchi gel elektroforezi amalga oshirilganda, RNK ketma-ketligining o'lchamini aniqlash mumkin. Primer kengaytirish usuli bilan mRNK (transkripsiyani boshlash joyi) ketma-ketligining +1 asosini topish ham oson. Agar ortiqcha primer ishlatilsa, namunadagi mRNK miqdorini ushbu usul bilan aniqlash mumkin.
02-rasm: Primer kengaytmasi
Nick Translation va Primer kengaytmasi oʻrtasidagi farq nima?
Nick Translation - Primer kengaytmasi |
|
| Nik tarjimasi - bu turli gibridlanish reaksiyalari uchun etiketli DNK zondlarini yaratuvchi jarayon. | Primer kengaytmasi muayyan RNKni topish yoki gen ekspressiyasini oʻrganish uchun foydalaniladigan texnikadir. |
| Ishlatilgan fermentlar | |
| DNase 1 va DNK polimeraza fermentlari ishlatiladi. | Teskari transkriptaza fermenti ishlatiladi. |
| Ahamiyat | |
| Nik tarjimasi maxsus DNK ketma-ketligini belgilashni osonlashtiradi. | Primer kengaytmasi maxsus mRNK ketma-ketligi hajmini va namunadagi miqdorni aniqlash imkonini beradi. |
Xulosa – Nick Translation va Primer kengaytmasi
Nik tarjimasi DNase 1 va E coli DNK polimeraza 1 fermentlarining faolligiga asoslangan etiketli zondlarni sintez qilish uchun ishlatiladigan usuldir. Bu turli xil duragaylash usullaridan oldin laboratoriyalarda qo'llaniladigan in vitro usuli. Nikni tarjima qilish jarayonida DNK polimeraza 1 ning 5'-3' ekzonukleaza faolligi nikdan oldin nukleotidlarni olib tashlaydi va DNK polimeraza 1ning polimeraza faolligi olib tashlangan nukleotidlarni nik orqasidagi etiketli nukleotidlar bilan almashtiradi. Primer kengaytmasi - bu aralashmadan ma'lum bir RNK transkriptini aniqlash va qiziqish RNK hajmi va miqdorini aniqlash uchun ishlatiladigan usul. Bu taxallus tarjimasi va primer kengaytmasi oʻrtasidagi farq.
