Nik koʻchirish va oxirini toʻldirish oʻrtasidagi asosiy farq shundaki, nikni tarjima qilish turli gibridlanish reaksiyalari uchun etiketli DNK zondlarini yaratuvchi jarayon boʻlib, yakuniy toʻldirish esa bir ipli oʻsimtalarga nukleotidlarni qoʻshish orqali toʻmtoq boʻlaklarni hosil qiluvchi usuldir.
Nik tarjimasi va oxirini toʻldirish molekulyar biologiyada qoʻllaniladigan ikkita usuldir. Nik translatsiyasi maxsus nukleotidlar ketma-ketligini aniqlash uchun duragaylash uchun zondlarni belgilash uchun ishlatiladi. Oxirgi plomba bir ipli o'simtalar bilan yopishqoq uchlari bo'lgan to'mtoq bo'laklarni tayyorlash uchun ishlatiladi. Ikkala usul ham katta ahamiyatga ega va ular muntazam ravishda molekulyar tadqiqot laboratoriyalarida amalga oshiriladi.
Nik tarjimasi nima?
Nik tarjimasi turli molekulyar biologik usullar uchun yorliqli zondlarni tayyorlashda qoʻllaniladigan muhim texnikadir, masalan, blotlash, in situ gibridizatsiya, lyuminestsent in situ duragaylash va boshqalar. Bu DNKni etiketlashning in vitro usulidir. DNK problari ma'lum DNK yoki RNK ketma-ketligini aniqlash uchun ishlatiladi. Belgilangan zond yordamida nuklein kislotaning murakkab aralashmasidan ma'lum bo'laklarni belgilash yoki ko'rish mumkin. Shuning uchun etiketli problar turli xil texnikalar yordamida tayyorlanadi. Nik tarjimasi DNase 1 va DNK polimeraza 1 fermentlari yordamida etiketli zondlarni ishlab chiqaradigan shunday usullardan biridir.
01-rasm: Nik tarjimasi
Nikni tarjima qilish jarayoni DNase 1 fermenti faolligi bilan boshlanadi. DNase 1 nukleotidlar orasidagi fosfodiester aloqalarini uzib, ikki zanjirli DNKning fosfat magistraliga niklarni kiritadi. Nik yaratilgach, nukleotidning erkin 3' OH guruhi hosil bo'ladi va unga DNK polimeraza 1 fermenti ta'sir qiladi. DNK polimeraza 1 ning 5' dan 3' gacha bo'lgan eksonukleaza faolligi nukleotidlarni nikdan DNK zanjirining 3' yo'nalishiga qarab olib tashlaydi.
Bir vaqtning oʻzida DNK polimeraza 1 fermentining polimeraza faolligi ishlaydi va olib tashlangan nukleotidlar oʻrniga nukleotidlar qoʻshadi. Agar nukleotidlar etiketlangan bo'lsa, almashtirish belgilangan nukleotidlar bilan sodir bo'ladi va u identifikatsiya qilish uchun DNKni belgilaydi. Va nihoyat, bu yangi sintezlangan etiketli DNK turli gibridlanish reaksiyalarida zond sifatida ishlatilishi mumkin.
Oxirgi toʻldirish nima?
Oxirgi toʻldirish molekulyar biologiyada toʻmtoq boʻlaklarni yasashda qoʻllaniladigan usuldir. Cheklov hazm qilish o'simtalar bilan bo'laklarni hosil qiladi. Bu fragmentlar plazmid vektorlariga bog'lanish uchun mos kelmasligi mumkin. Vektorlar ko'pincha mos kelmaydigan uchlarni birlashtirishga imkon berish uchun to'mtoq qilinadi. Shuning uchun, o'simtalari bo'lgan bo'laklarni polimerizatsiya uchun shablon sifatida qo'shimcha ipga nukleotidlarni qo'shish orqali to'mtoq qilish mumkin. Bu jarayon yakuniy toʻldirish deb nomlanadi.
DNK polimeraza I va T4 DNK polimerazasining Klenow fragmenti kabi DNK polimerazalari oxirgi to'ldirishni katalizlaydi. Ular nukleotidlarni to'ldirish uchun qo'shadilar (5' → 3') va chaynashadi (3' → 5'). Yopishqoq uchlari to'ldirilgandan so'ng, ular to'mtoq bo'lib qoladi va ular vektorga bog'lanishga tayyor.
Bundan tashqari, oxirgi plomba DNK molekulalarini belgilash uchun ishlatilishi mumkin. Biroq, u faqat yopishqoq uchlari bo'lgan DNK molekulalarini belgilash uchun ishlatilishi mumkin. Nick tarjimasi bilan solishtirganda, oxirini toʻldirish yumshoqroq usul boʻlib, kamdan-kam hollarda DNK parchalanishiga olib keladi.
Nick Translation va End Filling oʻrtasidagi oʻxshashliklar qanday?
- Nik tarjimasi ham, oxirini toʻldirish ham molekulyar biologik usullardir.
- Ulardan zondlarni belgilash uchun foydalanish mumkin.
- Ikkalasi ham in vitro
Nik tarjimasi va yakuniy toʻldirish oʻrtasidagi farq nima?
Nik tarjimasi duragaylash uchun yorliqli zondlarni yaratuvchi texnikadir. Bundan farqli o'laroq, oxirgi to'ldirish vektorlarga bog'lash uchun to'mtoq bo'laklarni yaratadigan usuldir. Shunday qilib, bu taxallus tarjimasi va oxirgi to'ldirish o'rtasidagi asosiy farq. Bundan tashqari, Nik tarjimasi 5’dan 3′ gacha ekzonuklea faolligini talab qiladi, oxirgi toʻldirish esa 5’-3′ eksonukleaza faolligini talab qilmaydi.
Quyidagi infografikada taxallus tarjimasi va yakuniy toʻldirish oʻrtasidagi farqlar batafsilroq berilgan.
Xulosa – Nick Translation vs End Filling
Nik translatsiyasi - bu radio-yorliqli nukleotidlarni DNKga kiritish usuli. U DNase 1 va E. coli DNK polimeraza 1 fermentlarining faoliyati asosida etiketli zondlarni sintez qiladi. Oxirgi plomba, boshqa tomondan, to'mtoq bo'laklarni ishlab chiqaradigan texnikadir. Parchalarning yopishqoq uchlari (bir ipli o'simtalar) bo'lsa, vektorlarga bog'lanish uchun ularni to'mtoq uchlari qilish kerak. Oxirgi to'ldirish mos nukleotidlarni qo'shadi va ularni bog'lash uchun mos qilish uchun to'mtoq uchi bo'laklarni hosil qiladi. Shunday qilib, bu taxallus tarjimasi va oxirgi toʻldirish oʻrtasidagi farqni umumlashtiradi.
