Asosiy farq – Nitroselüloza va PVDF
Western blotting - bu protein namunasidan o'ziga xos oqsillarni aniqlash va miqdorini aniqlash imkonini beruvchi usul. Texnikaning ishonchliligi jeldan oqsillarni singdirish uchun to'g'ri membranani tanlashga bog'liq. Mikroporoz membranalarning har xil turlari mavjud. Nitrotsellyuloza va PVDF membranalari boshqa turdagi membranalarga nisbatan o'ziga xos xususiyatlari tufayli tadqiqotchilar tomonidan afzal qilingan ikkita membranadir. Nitroselüloz yoki PVDF o'rtasidagi tanlov ham g'arbiy blotingdagi yana bir qiyinchilikdir. Nitrotsellyuloza ham, PVDF ham yuqori oqsilni singdirish qobiliyatiga ega. Nitrotsellyuloza va PVDF membranasi o'rtasidagi asosiy farq shundaki, nitroselüloza membranalari antikorlarni olib tashlash va antikorlarni qayta tekshirish uchun membranani qayta ishlatish qobiliyatiga ega emas, PVDF membranalari esa tozalash va qayta ishlatish qobiliyatiga ega.
Nitroselüloza nima?
Nitrotsellyuloza tsellyulozani nitrat kislota bilan davolash orqali ishlab chiqarilgan polimer boʻlib, molekulyar biologiyada mikrogʻovak membranalar yaratish uchun, ayniqsa janubiy, shimoliy va gʻarbiy bloting kabi tozalash usullari uchun ishlatiladi. Nitrotsellyuloza membranalarining teshik o'lchamlari 3 dan 20 mkm gacha. Nitrotsellyuloza mikrog'ovak membranalari membrana yuzasida sodir bo'ladigan immunokimyoviy reaktsiyani aniqlashni osonlashtiradi. Shuning uchun nitrotsellyuloza membranalari tez-tez oqsillarni immobilizatsiya qilish va g'arbiy blotlashda o'ziga xos oqsillarni aniqlash uchun ishlatiladi. Nitrotsellyuloza membranalari glikoproteinlar va nuklein kislotalarni ham harakatsizlantirishi mumkin.
Nitrotsellyuloza membranalari bir nechta xususiyatlar tufayli lateral oqim tahlillarida afzallik beriladi. Nitrotsellyuloza membranalari oqsillarni yuqori konsentratsiyada o'zlashtiradi. Membranani namlash uchun ishlatiladigan erituvchi nitroselüloza membranasi oqsilining so'rilishini kamaytirmaydi. Nitrotsellyuloza membranalari osongina kerakli jel hajmiga kesilishi mumkin va oqsillarni elektr yoki kapillyar o'tkazish orqali jeldan membranaga o'tkazadi. Nitrotsellyuloza yuqori bog'lanish potentsialiga ega bo'lgan membrana orqali oqsillarni tezroq oqishini ta'minlaydi. Nitrotsellyuloza ishlov berishning yaxshilangan kuchini ko'rsatadi. Nitrotsellyuloza membranasining yana bir o'ziga xos xususiyati shundaki, uni erituvchi bo'lmagan suvga chidamli yopishtiruvchi moddalar bilan turli plastik tagliklarga osongina yopishtirish mumkin.
01-rasm: western blotting uchun nitrotsellyuloza membranasi
PVDF nima?
Poliviniliden diflorid (PVDF) viniliden diftoridning polimerizatsiyasi natijasida hosil bo'lgan ftorpolimer bo'lib, oqsillarni yuqori immobilizatsiya qilish qobiliyatiga ega. Shuning uchun, PVDF dan tayyorlangan mikro gözenekli membranalar oqsillar aralashmalaridan o'ziga xos oqsillarni tahlil qilish uchun g'arbiy blot usullarida qo'llaniladi. PVDF membranalari aminokislotalarni tahlil qilish va oqsillarni ketma-ketlashtirish uchun ham ishlatilishi mumkin. Nitrotsellyuloza membranasi ustidagi PVDF membranasining eng muhim xususiyati shundaki, u osongina antikorlardan tozalanishi va keyingi antikor problari uchun qayta ishlatilishi mumkin.
PVDF membranalari nitrotsellyuloza membranalariga qaraganda qalinroq; shuning uchun qayta foydalanish paytida shikastlanishlarga nisbatan ancha chidamli. PVDF membranalari yuqori darajada hidrofobikdir. Shuning uchun ularni ishlatishdan oldin metanol yoki izopropanolda namlash kerak.
Nitroselüloza va PVDF o'rtasidagi farq nima?
Nitroselüloza va PVDF |
|
| Nitroselüloza tsellyulozadan tashkil topgan polimerdir. | PVDF - viniliden diftoridning polimerizatsiyasi natijasida hosil bo'lgan ftorpolimer. |
| Membrana gözenek hajmi | |
| Odatda teshik oʻlchamlari 0,1, 0,2 yoki 0,45m | Odatda teshik oʻlchamlari 0,1, 0,2 yoki 0,45 mkm |
| Proteinlarni bogʻlash qobiliyati | |
| Nitrotsellyuloza 80 dan 100 mkg/sm gacha oqsillarni bogʻlash qobiliyatiga ega2. | PVDF 170 dan 200 mkg/sm gacha oqsillarni bogʻlash qobiliyatiga ega2. |
| Sezuvchanlik | |
| Bu PVDFga nisbatan sezgirligi past. | Bu yuqori sezuvchanlikka ega. |
| Kam ifodalangan oqsillarni aniqlash | |
| Nitrotsellyuloza membranalarida sezgirlik past boʻlgani uchun u kam ifodalangan oqsillarni aniqlash uchun mos emas. | Bu yuqori sezuvchanligi tufayli kam ifodalangan oqsillarni aniqlash uchun koʻproq mos keladi. |
| Fon shovqini | |
| Bu pastroq fon shovqiniga ega | Bu fon shovqini yuqori. |
| Oqsillar bilan oʻzaro taʼsiri | |
| Oqsil molekulalari nitrotsellyuloza membranalari bilan hidrofobik oʻzaro taʼsirlar orqali bogʻlanadi. | Oqsillar PVDF membranalari bilan hidrofobik va dipol oʻzaro taʼsirlar orqali bogʻlanadi. |
| Membrananing tabiati | |
| Nitroselüloza mo'rt va mo'rt. Biroq, nitroselüloza versiyalari mavjud va ular chidamli. | PVDF yanada bardoshli va yuqori kimyoviy qarshilikka ega. |
| Olib tashlash va qayta ishlatish imkoniyati | |
| Nitrotsellyuloza signalni yoʻqotmasdan olib tashlash va qayta tekshirishda qiynalishi mumkin. | PVDF ilovalarni qayta tekshirish va tartiblash uchun ideal. |
| Muvofiqlik | |
| Nitroselüloza past molekulyar og'irlikdagi oqsillarni aniqlash uchun ideal. | PVDF yuqori molekulyar ogʻirlikdagi oqsillarni aniqlash uchun koʻproq mos keladi. |
| Boshqa foydalanish | |
| Nitrotsellyuloza nuklein kislotalarni tahlil qilish va nuqta/uyalarni tozalash uchun ishlatilishi mumkin. | PVDF oqsil ketma-ketligi va qattiq fazali tahlil tizimlari uchun ishlatilishi mumkin. |
| Narxi | |
| Bu PVDF membranalardan arzonroq. | Bu nitrotsellyuloza membranalaridan qimmatroq. |
| Oldindan namlash kerak | |
| Nitrotsellyuloza membranalari metanol bilan oldindan namlashni talab qilmaydi | PVDF membranalari metanol bilan oldindan namlashni talab qiladi. |
Xulosa – Nitroselüloza va PVDF
Nitrotsellyuloza membranalari lateral oqim tahlili uchun tijoratda ishlatiladigan birinchi membranalar edi. Ular oqsillarni singdirish qobiliyatiga ega. Shuning uchun nitrotsellyuloza membranalari western blotingda qo'llaniladi. PVDF g'arbiy blotlashda qo'llaniladigan membrananing yana bir turi bo'lib, u yuqori proteinni singdirish qobiliyatiga ega. Ikkala tur ham oqsillarni tahlil qilish uchun western blotingda qo'llaniladi. Biroq, PVDF membranalari ko'proq o'ziga xos xususiyatlarga ega, bu ularni g'arbiy blot uchun nitroselüloz membranalarga qaraganda ko'proq moslashtiradi. Biroq, nitroselüloz membranalari past molekulyar og'irlikdagi oqsillarni aniqlash uchun ko'proq mos keladi, PVDF membranalari yuqori molekulyar og'irlikdagi oqsillarni aniqlash uchun ko'proq mos keladi. Bu nitroselüloza va PVDF membranalari o'rtasidagi farq.
