shRNA va siRNA
RNK aralashuvi (RNKi) jarayonida maqsadli genning ifodasi yuqori o'ziga xoslik va selektivlik bilan buziladi. RNKi tabiiy jarayon bo'lib, u kichik interferent RNK (siRNK) va qisqa sochli RNK (shRNK) va bifunksional shRNKni o'z ichiga oladi. Hozirgi vaqtda RNKi shaxsiylashtirilgan saraton terapiyasi uchun vosita sifatida keng qo'llaniladi. RNKning qo'llanilishi asosan kimyoviy sintezlangan ikki zanjirli siRNK va vektorga asoslangan shRNK molekulalari bilan amalga oshiriladi. Bu ikki molekula o'xshash funktsional natijalarga ega bo'lsa-da, ular tuzilishida farqlanadi; Shunday qilib, bu ikki molekulaning molekulyar ta'sir mexanizmlari, RNK yo'llari va maqsaddan tashqari ta'siri ham farqlanadi.
shRNA
shRNA kichik RNK molekulalarining ketma-ketligi bo'lib, u RNK davomida maqsadli gen ifodasini o'chirish uchun ishlatilishi mumkin bo'lgan qattiq soch turmagini aylantiradi. ShRNKning ifodalanishiga virus yoki bakteriya bo'lishi mumkin bo'lgan vektor yoki plazmidlarni etkazib berish orqali erishiladi. Ular hujayralar yadrosida sintezlanadi va keyingi jarayonlar uchun sitoplazmaga o'tkaziladi. Bu molekulalar miRNKning o'xshash etilish yo'llariga ega; Shunday qilib, miRNK sintezi shRNK sintezini tushunish uchun zamin yaratdi. RNK polimeraza II yoki III RNK polimeraza II yoki III promotorlari orqali shRNKni transkripsiyalashi mumkin. ShRNKlardan foydalanishning afzalligi shundaki, ular nisbatan past degradatsiya va aylanish tezligiga ega. Kamchilik shundaki, u ifoda vektoriga muhtoj, bu esa xavfsizlik bilan bog‘liq ayrim muammolarni keltirib chiqarishi mumkin.
siRNA
siRNKlar uzunligi 20-25 ta asosiy juftlikdan tashkil topgan ikki zanjirli RNK molekulalaridir. Ular RNK yo'lida qo'shimcha nukleotidlar ketma-ketligi bilan har qanday genni o'chirish orqali genlarni bostirish uchun ishlatiladi.siRNKni transfeksiya qilish orqali genni nokdaun qilish ko'pincha vaqtinchalik ta'sir tufayli muvaffaqiyatsiz bo'ladi; ayniqsa tez bo'linadigan hujayralarda va bostirish uzoq davom etmaydi. Ushbu muammoni bartaraf etish uchun siRNK qisqa soch turmagi tuzilishini kiritish orqali o'zgartiriladi. Bu o'zgartirilgan molekula keyinchalik shRNK deb nomlanadi. shRNK normal ishlashi uchun Dicer tomonidan siRNKga aylantirilishi kerak.
shRNK va siRNK o'rtasidagi farq nima?
• siRNKdan farqli o'laroq, shRNK qo'shimcha soch tolasi tuzilishiga ega. shRNK siRNKning oʻzgartirilgan versiyasidir.
• shRNK ifoda vektorini talab qiladi, siRNK esa talab qilmaydi.
• shRNK uzoq muddatga, siRNK esa faqat qisqa muddatli genlarni nokdaun qilish uchun ishlatilishi mumkin.
• siRNKning gen bostirilishidan farqli oʻlaroq, shRNKning bostirilishi uzoq davom etadi va agar u tegishli virus vektori orqali kiritilsa, u doimiy gen suspenziyasini keltirib chiqarishi mumkin.
• Dicer shRNKni normal funksiyalarini bajarishi uchun uni yana siRNK molekulasiga aylantirish uchun kerak.
