Klonlar ketma-ketligi bilan klonlash va ov miltig'i ketma-ketligi o'rtasidagi asosiy farq ularning o'tkazish usulidadir. Klonlash boʻyicha klonlash usuli xromosomalarni xaritalash va sekvensiyadan oldin klonlashni oʻz ichiga oladi, oʻq otish bilan klonlash esa ketma-ketlik davomida xromosomalarni xaritalash va klonlash bosqichlarini oʻtkazib yuboradi.
Klonlar ketma-ketligi bilan klonlash va otishma sekvensiyasi orqali klonlash zamonaviy genom sekvensiyasining ikkita usuli hisoblanadi. Klonlash bo'yicha klonlash - ketma-ketlikning yanada ishonchli usuli. Biroq, o'q otishni o'rganish orqali klonlash usuli tezroq va arzonroq. Maqolada klon sekvensiyasi va ov miltig'i ketma-ketligi orqali klonlash o'rtasidagi nozik farqga e'tibor qaratilgan.
Klonlash tartibi boʻyicha klonlash nima?
Klonlash orqali klonlash - bu genomlarni ketma-ketlashtirish usuli. Bu DNKning bo'linishidan oldin har bir xromosomaning xaritasini talab qiladi. Xaritadan so'ng DNK 150 kilobaza uzunlikdagi bo'laklarga bo'linishi kerak. Keyin bu qismlar ketma-ketlikka tayyor bo'ladi. Keyingi qadam DNK fragmentlarini bakterial sun'iy xromosomalarga (BAC) va keyin bakteriya hujayralariga kiritishdir. Bo'laklar bakteriya hujayralari ichida bo'lganligi sababli, har safar bakteriyalar bo'linganda, kiritilgan DNK bo'laklari ham bo'linadi va ko'plab bir xil nusxalarni hosil qiladi. Keyin, individual bakterial klon DNK 500 ta asosiy juft uzun bo'laklarga bo'linadi. Ular kichikroq va bir-birining ustiga chiqadigan bo'laklardir. Keyinchalik, ketma-ketlik ushbu fragmentlarni ma'lum DNK ketma-ketligiga ega vektorga kiritish bilan amalga oshiriladi. Vektorning ma'lum ketma-ketligidan boshlab, ketma-ketlik noma'lum ketma-ketlikgacha davom etadi.
Tartibga solishni tugatgandan so'ng, ketma-ketliklarning bir-biriga o'xshash joylarini aniqlash kerak. Shundan so'ng, fragmentlarning birlashishi dastlab BAClarda taqdim etilgan kattaroq bo'laklarni hosil qilish uchun sodir bo'ladi. Keyinchalik, kattaroq bo'laklarning xromosomaga yig'ilishi genom xaritasiga muvofiq amalga oshiriladi.
01-rasm: Klonlash tartibi boʻyicha klonlash
Klonlash orqali klonlashning muhim afzalligi shundaki, oldindan tayyorlangan genom xaritasi kattaroq fragmentlarni ishonchli yig'ishga yordam beradi. Ammo, bu ketma-ketlik usulining kamchiligi shundaki, genom xaritalarini yaratish va klonlarni yaratish ko'p vaqt talab etadi. Biroq, bu “Inson genomi loyihasi” davomida afzal qilingan usul edi.
Shotgun ketma-ketligi boʻyicha klon nima?
Ov qurolini ketma-ketlashtirish orqali klonlash - bu DNK ketma-ketligini tasodifiy ravishda ko'plab kichik bo'laklarga ajratadigan va ketma-ketlikni bir-biriga yopishgan hududlarni kuzatish orqali qayta yig'adigan ketma-ketlik usuli. Kattaroq sutemizuvchilar genomlarini ketma-ketlikni klonlash va yig'ish qiyin. Bu ularning strukturaviy murakkabligi va hajmi bilan bog'liq. Klon sekvensiyasi usuli bo'yicha klon ishonchli bo'lsa ham, murakkab organizmlarning genomlarini ketma-ketlashtirish uzoq vaqt talab etadi. Shu sababli, ov miltig'ini ketma-ketlashtirish orqali klonlash tezroq bajarilishi mumkin bo'lgan ishonchli arzonroq ketma-ketlik usuliga aylandi. Shunday qilib, zamonaviy olimlar murakkab genomlarni hal qilishda ushbu ketma-ketlik usuliga tayanadilar.
02-rasm: Otishma quroli ketma-ketligi boʻyicha klonlash
Ov qurolini sekvensiyalash usuli bilan klonlashda an'anaviy genom xaritalash va klonlash bosqichlari amalga oshirilmaydi. Dastlab, butun genom 20 kilobazadan 300 kilobazagacha bo'lgan turli o'lchamlarga bo'linadi. Keyinchalik, ketma-ketlik amalga oshiriladi. Keyin, murakkab kompyuter dasturlari yordamida, bir-biriga o'xshash hududlarga qarab, parchalarni yig'ish kerak.
Toʻpponcha sekvensiyasi orqali klonlash mavjud genom ketma-ketliklarining aniqligini oshirishga yordam beradi. Ushbu usulning asosiy afzalligi shundaki, u klonlash usuli bilan klonlashdan ko'ra tezroq va arzonroqdir. Biroq, bu jarayon genetik xaritadan foydalanishni o'z ichiga olmaydi. Shunday qilib, yig'ish paytida xatolar ko'proq sodir bo'ladi. Shunday qilib, bu o'q otishni o'rganish usuli bilan klonlashda katta kamchilikdir.
Clone Sequencing by Clone and Shotgun Sequencing o'rtasidagi o'xshashliklar qanday?
- Klon sekvensiyasi orqali klonlash ham, otishma sekvensiyasi ham genom sekvensiyasining ikkita usuli hisoblanadi.
- Har ikkala ketma-ketlik texnikasi davomida bir-biriga yopishgan hududlarni aniqlash orqali parchalangan qismlarni yig'ish amalga oshiriladi.
- Shuningdek, DNKning kichikroq boʻlaklarga boʻlinishi ham klonlash, ham miltiq ketma-ketligi uchun zarurdir.
Klonlash ketma-ketligi bilan klonlash va otishma sekvensiyasi oʻrtasidagi farq nima?
Klonlash usuli yordamida klonlash ikkita asosiy bosqichni o'z ichiga oladi: xromosomalarni xaritalash va klonlash. Bundan farqli o'laroq, ov miltig'i ketma-ketligi bilan klonlash bu ikki bosqichni bajarmaydi; u tasodifiy ravishda DNK ketma-ketliklarini ko'plab kichik bo'laklarga ajratadi va bir-birining ustiga chiqadigan hududlarni kuzatish orqali ketma-ketlikni qayta yig'adi. Demak, bu klon sekvensiyasi va ov miltig'i ketma-ketligi orqali klonlash o'rtasidagi asosiy farq. Shu omil tufayli, klonlash ketma-ketligi bilan klonlash qimmat va ko‘p vaqt talab qiluvchi jarayon bo‘lib, o‘q otish bilan klonlash esa tezroq va arzonroq.
Biroq, klonlash ketma-ketligi orqali klonlash paytida yig'ish paytida xatolar kam uchraydi. Shuning uchun u yuqori ishonchlilikka ega. Biroq, o'q otishni o'rganish orqali klonlash nisbatan kamroq ishonchli usuldir. Demak, bu, shuningdek, klon ketma-ketligi bilan klonlash va ov miltig‘i ketma-ketligi o‘rtasidagi sezilarli farq.
Quyidagi info-grafikada klonlash va ov miltigʻi ketma-ketligi boʻyicha klonlash oʻrtasidagi farq haqida batafsil maʼlumot berilgan.
Xulosa – Klon ketma-ketligi bilan klonlash va otish quroli ketma-ketligi
Klon ketma-ketligi va ov miltig'i ketma-ketligi bo'yicha klonlash o'rtasidagi farqni umumlashtirganda, klon ketma-ketligi va ov miltig'i ketma-ketligi bilan klon genom sekvensiyasining ikkita usuli hisoblanadi. Biroq, klonlarni ketma-ketlashtirish texnikasi bo'yicha klonlash genomni xaritalash va klonlash jarayonlarini o'z ichiga oladi, ov miltig'i bilan klonlash esa bunday emas. Shunday qilib, bu klonlash va ov miltig'ini ketma-ketlashtirish orqali klonlash o'rtasidagi asosiy farq. Genom xaritasi klonlash jarayonida klonlar ketma-ketligi bilan amalga oshirilganligi sababli, ketma-ketliklarni yig'ish paytida xatolar kamroq bo'ladi. Biroq, ov miltig'ini ketma-ketlashtirish orqali klonlash ancha tez va arzonroq jarayondir. Biroq, u nisbatan kamroq ishonchli. "Inson genomi loyihasi" davomida klonlash orqali klonlash afzal qilingan tartiblash usuli edi. Biroq, zamonaviy molekulyar biolog ko'proq o'q otishni o'rganish orqali klonlashga tayanadi.
