Asosiy farq – Klonlash va Subklonlash
Klonlash va subklonlash molekulyar biologik protseduralar bo'lib, ularda genetik jihatdan bir xil hujayralar yoki DNK yoki genga ega bo'lgan organizmlar qiziqish uyg'otadi. Klonlash - bu qiziqqan gen yoki DNKni vektorga kiritish, uni xost bakteriyasida ko'paytirish va genetik tarkibning aniq nusxalari bo'lgan hujayralar yoki organizmlarni ishlab chiqarishni o'z ichiga olgan usul. Subklonlash - bu vektorga allaqachon kiritilgan qiziqish genini ikkilamchi vektorga kiritish, uni xost bakteriyasida replikatsiya qilish va hujayralar yoki organizmlarning genetik jihatdan bir xil nusxalarini ishlab chiqarishni o'z ichiga olgan usul. Klonlash va subklonlash o'rtasidagi asosiy farq shundan iboratki, klonlashda vektorga bog'langandan so'ng, qiziqish geni klonlash jarayonini davom ettiradi, subklonlashda esa allaqachon klonlangan qiziqish gen asosiy vektordan ajratiladi va yana kiritiladi. qabul qiluvchi vektori va jarayonni davom ettiring.
Klonlash nima?
Klonlash genetik jihatdan bir xil organizmlar yoki hujayralarni ishlab chiqarish jarayonidir. Tabiatda klonlash jinssiz ko'payish vositasida sodir bo'ladi. Agar genetik rekombinatsiya yoki o'zgarish bo'lmasa, qiz hujayralar ota-onaning genetik tarkibini oladi. Prokaryotik va eukaryotik organizmlar klonlarni ikkilik boʻlinish, tomurcuklanma, mitoz va boshqalar yoʻli bilan hosil qiladi. Molekulyar biologiyada genlarni yoki DNKning oʻziga xos qismlarini klonlash bu DNK boʻlimining tuzilishi va funksiyasini oʻrganishning mashhur usuli hisoblanadi.
Molekulyar klonlashning asosiy maqsadi genetik jihatdan bir xil hujayralar yoki qiziqish uyg'otadigan DNK fragmenti (asosan genlar) bo'lgan organizmlarning millionlab nusxalarini yaratishdir. U boshqasining aniq genetik nusxalari bilan organizmlarni yaratadi. Birinchi navbatda, strukturaviy va funktsional ma'lumotlarni olish va DNK ketma-ketligi uchun molekulyar tadqiqotlarda o'ziga xos genlar klonlanadi. Shuningdek, maxsus oqsillar yoki mahsulotlarni katta hajmda ishlab chiqarish uchun klonlash keng qo'llaniladi.
Klonlash tartibi
Klonlash jarayonining asosiy bosqichlari quyidagicha.
- Qiziqarli genni aniqlash va izolyatsiya qilish. (Qiziqarli genni PCR yordamida kuchaytirish).
- Qiziqarli genning hazm boʻlishini cheklash (Restriksiya endonukleazasi genni kesib tashlaydi).
- Vektorli DNKni hazm qilishni cheklash. (Vektor DNK ham xuddi shu cheklovchi endonukleaz yordamida kesiladi).
- Vektorga genning kiritilishi va rekombinant molekulaning shakllanishi.
- Rekombinant vektorning xost bakteriyaga aylanishi.
- Oʻzgartirilgan bakteriyalarni ajratish va identifikatsiya qilish (plazmid vektori tanlangan genni oʻz ichiga olishi kerak, koʻpincha oʻzgartirilgan bakteriyalarni koʻrish uchun antibiotiklarga chidamlilik geni).
- Xostda rekombinant gen ifodasi.
01-rasm: Klonlash tartibi
Subklonlash nima?
Subklonlash - bu genning kerakli funksionalligini olish uchun genning ifodasini ko'rish uchun qiziqish genini bir vektordan boshqa vektorga o'tkazish jarayoni. Bu usulda ikkita vektor ishtirok etadi; ya'ni, asosiy vektor va maqsad vektor. Klonlangan qo'shimchalar subklonlashda yana ikkinchi vektorga o'tkaziladi. Genni birinchi vektordan ikkinchi vektorga o'tkazishdan maqsad birinchi vektor tomonidan amalga oshirilmaydigan narsani olish yoki DNKning allaqachon klonlangan bo'lagi ichida genni yana ajratib olish va uni yolg'iz ifodalashdir. Ushbu protsedura boshida cheklash fermentlari qo'llaniladi.
Subklonlash tartibi
Subklonlashning asosiy bosqichlari quyidagicha.
- Restriktor endonukleazalari yordamida donor plazmidida (ota vektorda) qiziquvchi DNKni ajratish.
- Qiziqarli DNKni PCR yordamida kuchaytirish.
- PZR mahsulotini (qiziqilgan DNK) gel elektroforez bilan tozalash.
- Retsipient plazmidining asosiy plazmidda qiziquvchi DNKni ajratish uchun ishlatiladigan bir xil cheklovchi endonukleazlar yordamida ochilishi.
- Subklonlangan plazmidni yaratish uchun qiziqtiruvchi DNK (gen)ni retsipient plazmidiga bog'lash.
- Subklonlangan vektorning vakolatli xost bakteriyasiga aylanishi.
- Oʻzgartirilgan hujayralar skriningi.
- Plazmid DNKni tozalash va kerakli mahsulotlarni olish uchun DNK sekvensiyasi yoki genlarni ifodalash uchun foydalanish.
Subklonlash klonlangan genlar guruhidan bitta gen ajratib olinganda yoki qiziqtiruvchi genning aniq funksiyasini koʻrish uchun foydali plazmidga oʻtishi kerak boʻlganda amalga oshiriladi.
02-rasm: Subklonlash tartibi
Klonlash va pastki klonlash o'rtasidagi farq nima?
Klonlash va Subklonlash |
|
| Klonlash genetik jihatdan bir xil organizmlar yoki hujayralarni ishlab chiqarish jarayonidir. | Subklonlash - bu genning kerakli funksiyasini olish uchun genning ifodasini ko'rish uchun qiziqish genini bir vektordan boshqa vektorga ko'chirish protsedurasi. |
| Jarayon | |
| Qiziqarli DNKni organizmdan ajratib oling va vektorga bir marta kiriting va klonlang | Allaqachon klonlangan DNK birinchi vektordan ajratiladi va ikkinchi vektorga kiritiladi va klonlanadi. |
| Vektorlar orqali harakatni kiritish | |
| Qoʻshimchalarni (qiziqilgan DNK) bir vektordan boshqa vektorga oʻtkazmaydi. | Qoʻshimchalarni asosiy vektordan maqsad vektorga oʻtkazish. |
Xulosa – Klonlash va Subklonlash
Klonlash genetik jihatdan bir xil hujayralar yoki kiritilgan gen yoki DNKga ega organizmlarni yaratadi. U mezbon bakteriya ichidagi vektorga va ekspressiyaga qiziqqan DNKni ajratish va kiritish orqali davom etadi. Subklonlash klonlash bilan o'xshash bosqichlarni baham ko'radi. Biroq, subklonlashda allaqachon klonlangan DNK fragmenti (qiziqilgan gen) vektorga kiritiladi va mezbon bakteriyaga aylanadi. Bu klonlash va subklonlash o'rtasidagi asosiy farq.
