Asosiy farq – Oldinga va teskari astar
Polimeraza zanjiri reaktsiyasi (PCR) molekulyar biologik ilovalarda qoʻllaniladigan DNKni kuchaytirish usulidir. Bu, ayniqsa, qiziqqan DNK ketma-ketligining millionlab milliardlab nusxalarini yaratadigan keng tarqalgan ishlatiladigan texnikadir. Bu laboratoriyalarda bajariladigan in vitro usuli. PCR texnikasi butunlay Taq polimeraza deb ataladigan tijoratda ishlab chiqarilgan DNK polimeraza bog'liq. Bundan tashqari, u bir nechta boshqa komponentlarni va to'g'ri haroratni saqlashni talab qiladi. Muhim komponentlardan biri primerlardir. Primerlar - bu maqsadli DNK ketma-ketligi uchun maxsus mo'ljallangan qisqa DNK ketma-ketliklari. Ularning uzunligi odatda 20 ga yaqin nukleotidlardan iborat. Taq polimeraza nukleotidlarni oldindan mavjud nukleotidlar ketma-ketligiga qo'shishni katalizlaydi. Demak, primerlar yangi iplar sintezining boshlang'ich nuqtasi bo'lib xizmat qiladi. Taq polimeraza faqat 5' dan 3'gacha yo'nalishda ishlaydi, shuning uchun DNK sintezi xuddi shu 5' dan 3'gacha bo'lgan yo'nalishda sodir bo'ladi. DNK ikki zanjirli bo'lganligi sababli, PCRda ikki turdagi primer kerak bo'ladi. Ular oldinga astar va teskari astar sifatida tanilgan. Oldinga va teskari primerlar DNK sintezi sodir bo'lganda DNKdagi primerning cho'zilish yo'nalishiga qarab nomlanadi. Oldinga primer antisens DNK zanjiri bilan tavlanadi va 5' dan 3'gacha bo'lgan genning + ve iplari sintezini boshlaydi. Teskari primer sezuvchi ip bilan tavlanadi va kodlovchi ipning komplementar zanjiri sintezini boshlaydi; Bu genning ipini 5 dan 3 gacha yo'nalishga aylantiradi. Bu oldinga va teskari primerlar orasidagi asosiy farq.
Forward Primer nima?
Oldinga yoʻn altirish genning kodlash zanjiri yoki sezuvchi zanjirining sintezidir. Taq polimeraza 5' dan 3' gacha yo'nalishda yangi ipning sintezini katalizlaydi. Kodlash zanjirining sintezi primer kodlanmagan yoki antisens ip bilan tavlanib, 5' dan 3' gacha cho'zilganida sodir bo'ladi.
01-rasm: Oldinga va teskari astarlar
Antisens zanjiri yoki kodlanmagan ip yoki shablon ipi bilan tavlanadigan primer oldinga primer sifatida tanilgan, chunki oldinga siljigan primer kodlash yoki genning ijobiy zanjiri sintezida boshlang'ich nuqta bo'lib xizmat qiladi. Oldinga primer qisqa nukleotidlar ketma-ketligiga ega bo'lib, u antisens ipning 3' yon tomonini to'ldiradi. U antisens zanjiri bilan gibridlanadi va shablon ipini to'ldiruvchi nukleotidlarni qo'shish uchun Taq polimerazasini osonlashtiradi.
Teskari astar nima?
Teskari primer - sezgi zanjirining 3' uchi yoki kodlash zanjiri bilan tavlanadigan qisqa DNK ketma-ketligi. Teskari primer kodlash ketma-ketligi yoki kodlanmagan ketma-ketlikning qo'shimcha chizig'ini sintez qilish uchun boshlang'ich nuqta bo'lib xizmat qiladi. Teskari primer kodlash chizig'ining 3 'uchiga qo'shimcha ravishda ishlab chiqilgan. Demak, u kodlovchi ipning yon tomonidagi 3' uchi bilan tavlanadi va Taq polimeraza antisens ipni yoki shablon ipini sintez qilish imkonini beradi. Uning yoʻnalishi teskari boʻlgani uchun bu astar teskari astar sifatida belgilangan.
Teskari va toʻgʻridan-toʻgʻri primerlar DNKning maqsadli yoki qiziqqan alohida hududlarini millionlab milliardlab nusxalarini ishlab chiqarish uchun muhimdir.
Toʻgʻri va teskari astar oʻrtasidagi oʻxshashliklar qanday?
- Toʻgʻri va teskari primerlar oligonükleotidlardan tayyorlanadi.
- Toʻgʻri va teskari primerlar DNK qoʻsh zanjirlarining yonma-yon uchlarini toʻldiruvchi qisqa nukleotidlar ketma-ketligiga ega.
- Toʻgʻri va teskari primerlar odatda 20 ta nukleotiddan iborat.
- Toʻgʻri va teskari primerlar polimeraza zanjiri reaktsiyalarida ishlatiladi.
- Toʻgʻri va teskari primerlar tijorat maqsadida sintezlanadi.
- Toʻgʻri va teskari primerlar harorat barqaror va ular odatda oʻxshash Tmga ega.
- Toʻgʻri va teskari primerlar maqsadli DNK ketma-ketligi bilan tavlanadi.
- Ham oldinga, ham teskari primerlar PCR reaktsiyalariga muvofiq ishlab chiqilgan.
- Toʻgʻri va teskari primerlar DNKni kuchaytirish uchun boshlangʻich nuqta sifatida xizmat qiladi.
- Ham teskari, ham toʻgʻridan-toʻgʻri primerlar maqsadli yoki qiziqqan DNK ketma-ketliklarining alohida hududlarini million nusxada ishlab chiqarish uchun muhimdir.
Toʻgʻri va teskari astar oʻrtasidagi farq nima?
Forward Primer vs Reverse Primer |
|
| Toʻgʻri yoʻn altirilgan primer bu kodlanmagan 3’ uchi yoki genning shablon zanjiri bilan gibridlangan qisqa DNK ketma-ketligi boʻlib, kodlash ketma-ketligini sintez qilish uchun boshlangʻich nuqta boʻlib xizmat qiladi. | Teskari primer qisqa DNK ketma-ketligi boʻlib, u kodlashning 3' uchi yoki shablon boʻlmagan ip bilan gibridlanadi va kodlanmagan ketma-ketlikni sintez qilish uchun boshlangʻich nuqta boʻlib xizmat qiladi. |
| Tavlangan ip | |
| Oldinga astarli tavlar shablonli ip bilan. | Teskari astarni shablonsiz ip bilan tavlash. |
| Natijada yangi ketma-ketlik | |
| Oldina primer kodlash ketma-ketligi sintezini osonlashtiradi. | Teskari primer kodlanmagan ketma-ketlikning sintezini osonlashtiradi. |
Xulosa – Oldinga va teskari astar
PZR texnikasida ikki turdagi primerlar mavjud. Ular oldinga va teskari primerlardir. Yangi DNK zanjiri sintezida primerning cho'zilishiga asoslanib, bu primerlar etiketlanadi yoki nomlanadi. Taq polimeraza yangi DNKni 5' dan 3' gacha yo'nalishda sintez qiladi. Shunday qilib, primerlar qo'sh iplarning 3' uchiga qo'shimcha sifatida ishlab chiqilgan. 5' dan 3'gacha bo'lgan yo'nalishda cho'zilgan oldinga siljish antisensning 3' uchi yoki shablon yoki kodlanmagan ketma-ketlik bilan gibridlanadi. U kodlash ketma-ketligini sintez qilish uchun boshlang'ich nuqta bo'lib xizmat qiladi. 5' dan 3'gacha bo'lgan yo'nalishda cho'zilgan teskari primer kodlashning 3' uchi yoki shablon bo'lmagan yoki sezgir ip bilan gibridlanadi. U kodlanmagan ketma-ketlikni sintez qilish uchun boshlang'ich nuqta bo'lib xizmat qiladi. Bu oldinga va orqaga astar o'rtasidagi farq.
