Asosiy farq – SDS sahifasi va Western Blot
Western blotting - bu protein namunasidan ma'lum bir oqsilni aniqlaydigan usul. Ushbu usul bir necha asosiy bosqichlar orqali amalga oshiriladi: gel elektroforezi, bloting va gibridizatsiya. Natriy dodesil sulfat poliakrilamid jel elektroforezi (SDS sahifasi) oqsillarni o'lchamlari (molekulyar og'irliklari) bo'yicha ajratish uchun ishlatiladigan jel elektroforez usulining bir turi. Western blot - bu SDS sahifasidagi oqsillarning bir xil naqshini o'tkazish uchun ishlatiladigan, qurituvchi membrananing maxsus varag'i. SDS Page va western blot o'rtasidagi asosiy farq shundaki, SDS Page aralashmadagi oqsillarni ajratish imkonini beradi, western blot esa aralashmadan ma'lum bir oqsilni aniqlash va miqdorini aniqlashga imkon beradi. Ikkalasi ham protein tahlilida foydalidir.
SDS sahifasi nima?
SDS Page oqsillarni ajratish uchun ishlatiladigan gel elektroforez usulidir. U odatda biokimyo, genetika, sud tibbiyoti va molekulyar biologiyada qo'llaniladi. Proteinlar namunadan olingandan so'ng, ular SDS va poliakrilamiddan tashkil topgan jelda ishlaydi. SDS - bu anion yuvish vositasi bo'lib, oqsillarni (oqsillarni denaturatsiyalash) va ularning molekulyar massasiga mutanosib ravishda linearlashtirilgan oqsillarga manfiy zaryad berish uchun ishlatiladi. Poliakrilamid jel uchun mustahkam tayanchga aylanadi. Salbiy zaryadlangan denatüratsiyalangan oqsillar jel orqali apparatning musbat uchiga o'tadi. Proteinlarning o'lchamlariga ko'ra, migratsiya tezligi oqsillar orasida farq qiladi va ajralish sodir bo'ladi. Shuning uchun SDS sahifasi alohida oqsillarni ularning oʻlchamlariga qarab ajratish uchun foydalidir.
Oqsillarni fraksiyalash uchun poliakrilamid gelni tayyorlash SDS sahifasida hal qiluvchi qadamdir. Poliakrilamidning to'g'ri konsentratsiyasi va ishlatiladigan o'zaro bog'liqlik agentining turi jelning jismoniy xususiyatlariga kuchli ta'sir qiladi, bu esa turli xil oqsillarni haqiqiy ajratishga olib keladi. Jelning gözenek o'lchamlarini samarali ajratish uchun to'g'ri boshqarilishi kerak. Biroq, SDS sahifasi yuqori aniqlikdagi oqsillarni ajratish usuli hisoblanadi.
SDS Page texnikasi oqsil tahlilida katta cheklovga ega. SDS oqsillarni ajratishdan oldin denatüratsiya qilgani uchun u fermentativ faollikni, oqsil bilan bog‘lanish o‘zaro ta'sirini, oqsil kofaktorlarini va hokazolarni aniqlashga imkon bermaydi.
01-rasm: SDS sahifasi
Western Blot nima?
Western blotting texnikasi oqsil aralashmasidan ma'lum bir oqsilni aniqlash va oqsil miqdori va molekulyar og'irligini o'lchash imkonini beradi. Western blot - bu SDS-poliakrilamid jelidagi oqsil naqshlarining oyna tasvirini olish uchun tozalash jarayonida ishlatiladigan membrana. G'arbiy blotlash uchun ishlatiladigan membrana asosan nitroselüloz yoki poliviniliden difloriddan (PVDF) iborat. O'tkazilgan oqsilli membrana kerakli proteinni aniqlash uchun ishlatilishi mumkin. Gibridizatsiya orqali kerakli oqsilni aniqlash uchun yuqori sifatli antikor kerak. Antikor o'zining o'ziga xos antijeni bilan bog'lanadi va kerakli antijen, ya'ni oqsil mavjudligini ko'rsatadi.
Oqsillarni SDS poliakrilamid jelidan western blotga o'tkazish elektroblotlash orqali amalga oshiriladi. Bu samarali va tez usul bo'lib, oqsillarni geldan elektroforez qilib, nitroselüloza membranasiga (g'arbiy dog') o'tkazadi.
02-rasm: Western Blot
SDS Page va Western Blot o'rtasidagi farq nima?
SDS Page vs Western Blot |
|
| SDS Page - bu gel elektroforez usuli. | Western blot - bu aralashmadagi ma'lum bir oqsilni aniqlash uchun membranada bajariladigan usul. |
| Foydalanish | |
| SDS sahifasi oqsillarni oʻlchamlari boʻyicha ajratish imkonini beradi. | Western blot SDS sahifa gelidagi oqsillarni naqshini oʻzgartirmasdan oʻtkazish imkonini beradi va maxsus antikorlar bilan duragaylash imkonini beradi. |
| Kamchiliklar | |
| Protein denatüratsiyasi, qimmatligi va neyrotoksin kimyoviy moddalarining mavjudligi bu texnikaning kamchiliklari hisoblanadi. | Ushbu uslub koʻp vaqt talab qiladi va yaxshi tajribali shaxsiy va maxsus nazorat qilinadigan sharoitlarni talab qiladi. |
Xulosa – SDS sahifasi va Western Blot
SDS sahifasi va western blot oqsil tahlilida ishtirok etadigan ikkita usuldir. SDS sahifasi jelda oqsillarni molekulyar og'irligiga qarab oson ajratish imkonini beradi. Western blot o'ziga xos antikorlar bilan gibridizatsiya orqali ma'lum bir oqsilning mavjudligini va miqdorini tasdiqlashga yordam beradi. Bu SDS Page va western blot o'rtasidagi farq.
