Asosiy farq – YAC va M13 faj vektori
DNKni klonlash - bu organizmlarning muhim DNK qismlarini ko'paytirish imkonini beruvchi muhim jarayon. Bu xost organizmiga aylanadigan rekombinant DNKni yaratish uchun o'ziga xos DNKni vektor DNK bilan birlashtirishni talab qiladi. Vektor - bu DNK molekulasi bo'lib, u begona genetik materialni boshqa hujayra yoki organizmga o'tkazish uchun vosita sifatida ishlaydi. U xost organizmida replikatsiya qilish va rekombinant DNKning bir nechta nusxalarini ishlab chiqarish qobiliyatiga ega bo'lishi kerak. DNK klonlashda turli xil vektorlar qo'llaniladi. Xamirturushli sun'iy xromosoma (YAC) va M13 fag vektori ularning ikkita turidir. YAC va M13 fag vektori o'rtasidagi asosiy farq shundaki, YAC xamirturush hujayralarida ko'payadigan sun'iy xromosoma, M13 fag vektori esa E Coli hujayralarida ko'payadigan M13 bakteriofagining bir zanjirli dumaloq DNKsidir.
YAC vektori nima?
YAC - bu sun'iy ravishda qurilgan xromosoma bo'lib, begona DNKning katta qismini olib yurish va xamirturush hujayralari ichida ko'payish qobiliyatiga ega. U replikatsiya va barqarorlik uchun zarur bo'lgan sentromera, telomer va avtonom takrorlanuvchi ketma-ketliklarga ega. YAC, shuningdek, uni samarali klonlash vektoriga aylantirish uchun selektiv marker yoki markerlar va cheklash joylariga ega bo'lishi kerak. 1000 kb dan 2000 kb gacha bo'lgan katta ketma-ketliklar YACga kiritilishi va xamirturushga o'tkazilishi mumkin.
01-rasm: YAC vektor
M13 faj vektori nima?
Bacteriophage M13 virus boʻlib, E Coli ni yuqtirib, koʻpayadi. M13 bakteriofagining genomi kichik hajmga ega, taxminan 6,7 kb. Bu bir ipli, dumaloq va ijobiy ma'noli DNK. Bu virus E Coli bakteriyalarini F pilus orqali yuqtiradi. U ssDNK ga bakteriyaga kirgandan so'ng, u o'zining komplementar zanjirini sintez qiladi va dsDNK yoki M13 ning replikativ shakli (RF) ga aylanadi. RF mezbon organizm ichida plazmid kabi harakat qilishi mumkin. DsDNK E Coli ichida replikatsiyalanadi va yangi faglar bilan ssDNK hosil qiladi. Ushbu yangi faglar E Coli dan doimiy ravishda mezbon hujayrani o'ldirmasdan chiqariladi. Biroq, infektsiya E Coli o'sishini sekinlashtiradi. dsDNK bakteriya hujayralaridan olinishi va DNKni klonlashda vektor sifatida ishlatilishi mumkin. Ular M13 fag vektorlari sifatida tanilgan. Ularni osongina manipulyatsiya qilish va plazmid vektorlarga o'xshash foydalanish mumkin.
Ushbu M13 faglarini yuqtirishning o'ziga xos qobiliyati genlarni klonlashda vektor sifatida foydalanish uchun yaxshi malaka bo'lib xizmat qiladi. M13 ni vektorga aylantirganda, uning genomiga bir nechta elementlar kiritilishi kerak. Ular lak repressor (lac I) oqsili uchun gen, lac Z genining operator-proksimal hududi, lak promotori va ko'p klonlash joyi (polilinker). M13 ning dsDNKsi vektor sifatida foydalanilganda, uni plazmid vektori sifatida ko'rish mumkin. Biroq, ssDNA M13 dan foydalanish DNK ketma-ketligi va saytga yo'n altirilgan mutagenezda afzalliklarga ega.
M13 fag vektori lacZ mintaqasida bir nechta klonlash joyiga ega bo'lganligi sababli, rekombinatsiyalangan vektorlarni IPTG va X-Gal o'z ichiga olgan agar plastinkalarida ko'k/oq koloniya skriningi orqali osongina aniqlash mumkin. Plitalarda ishlab chiqarilgan ko'k rangli plitalar rekombinatsiyalangan faglarni o'z ichiga olmaydi. Shuning uchun klonlash uchun qo'shimchali faglar tanlanishi mumkin.
02-rasm: bakteriofag M13
YAC va M13 faj vektori oʻrtasidagi farq nima?
YAC vs M13 faj vektor |
|
| YAC genetik jihatdan yaratilgan xromosoma boʻlib, begona DNKning katta qismini olib yurish va xamirturush hujayralari ichida koʻpayish qobiliyatiga ega. | M13 fag vektori M13 bakteriofag tomonidan ishlab chiqilgan virus vektori boʻlib, u E Coli ga begona DNKni kiritish uchun ishlatiladi. |
| Maqsad | |
| YAClar genomik DNKning katta qismlarini xamirturushga klonlash uchun moʻljallangan. | M13 fag vektorlari E Coli ga begona DNKni kiritish uchun ishlatiladi. |
| Qoʻshish uzunligi | |
| YAClarda megabaza oʻlchamidagi genomik qoʻshimchalar boʻlishi mumkin (1000 kb – 2000 kb). | Qoʻshimchalar hajmi taxminan 1500 bit/s. |
| Qurilish | |
| YAC DNKni buzilmagan holda tozalash qiyin va YAC vektor tizimini yaratish uchun yuqori konsentratsiyani talab qiladi. | U tsiklik fotosintetik elektron zanjiri orqali sodir boʻladi. |
| Barqarorlik | |
| YAC barqaror emas. | M13 faglarni osongina ajratib olish mumkin. |
| Hajmi | |
| Fermentlar kattaroq molekulalardir. | M13 faglari YACga qaraganda barqaror. |
Xulosa – YAC va M13 faj vektori
YAC - xamirturush hujayralariga genetik materialning katta segmentlarini kiritish uchun xamirturush xromosomasining ma'lum bir hududidan foydalangan holda sun'iy ravishda qurilgan vektor tizimi. M13 fag vektori M 13 bakteriofagidan olingan vektor tizimi bo'lib, u E coli ni mezbon organizm sifatida ishlatadi. Bu YAC va M13 Phage Vector o'rtasidagi asosiy farq. Ikkalasi ham rekombinant DNK texnologiyasi va genlarni klonlashda bir xil darajada foydali.
