Asosiy farq – Tanlanadigan marker va Reporter geni
Gen muhandisligi texnikasi muhim genlarni organizmdan boshqa organizmga oʻtkazish uchun ishlatiladi. Chet genni boshqa organizmning genomiga kiritish va uni xost hujayrasida ifodalash genlarni uzatishdagi eng qiyin bosqichdir. Transformatsiya jarayonining muvaffaqiyatini aniqlash uchun rekombinant molekulada tanlangan marker va reportyor gen qo'llaniladi. Tanlanadigan marker - bu DNK ketma-ketligi yoki o'zgartirilmagan hujayralardan o'zgartirilgan hujayralarni tanlaydigan va tanlaydigan gen. Muxbir gen - bu o'zgartirilgan hujayralarni ajratish va kiritilgan genning xost ichida qanday ishlashini aniqlash yoki aniqlash uchun ishlatiladigan boshqa gen. Tanlanadigan marker va reportyor gen o'rtasidagi asosiy farq shundaki, tanlanadigan marker o'zgartirilmagan hujayralarni tekshirish va o'zgartirilgan hujayralarga signal berish uchun ishlatiladi, reportyor gen esa xost ichidagi gen ekspresyon darajasini aniqlash uchun ishlatiladi.
Tanlanadigan marker nima?
Gen injeneriyasida qiziqish geni mos vektorga kiritiladi va mezbon organizmlarga aylanadi. Biroq, transformatsiya faqat vakolatli xost hujayralarida muvaffaqiyatli bo'ladi va mezbon hujayralar xorijiy DNKni qabul qilishni rad etish imkoniyati mavjud. Shuning uchun o'zgartirilgan va o'zgartirilmagan hujayralarni farqlash keyingi tajribalarni davom ettirish uchun muhimdir. Shunday qilib, tadqiqotchilar o'zgartirilmagan hujayralardan o'zgartirilgan hujayralarni oson tanlash uchun vektorga tanlangan marker genini kiritadilar. Tanlanadigan marker - bu DNK ketma-ketligi, ayniqsa o'zgartirilgan hujayralarni aniqlashda foydali bo'lgan gen. Ushbu marker geni muhitda o'zgartirilmagan hujayralardan o'zgartirilgan hujayralarni sun'iy tanlashga mos keladigan xususiyatni namoyish etadi.
Molekulyar biologiyada ishlatiladigan eng keng tarqalgan tanlanadigan markerlar antibiotiklarga chidamli genlardir. Antibiotikga chidamlilik geni vektorga kiritiladi va xost hujayralariga, ayniqsa mezbon bakteriyaga aylanadi. Bu maxsus antibiotik bakteriyaning o'sish muhitiga kiritilgan. Selektiv marker mavjudligi sababli, selektiv sharoitda faqat tegishli tanlanadigan markerni o'z ichiga olgan hujayralar omon qolishi mumkin. O'zgartirilmagan hujayralar antibiotikli muhitda o'sishga qodir emas. Shuning uchun antibiotiklarga chidamli bo'lgan tanlab olinadigan marker tufayli o'zgartirilgan hujayralar osongina aniqlanadi.
Antimetabolitlar, gerbitsidlar uchun xususiyatlarni beruvchi genlar o'simlik genetik muhandisligida vektorlarni klonlashda selektiv belgilar sifatida ishlatiladi. Biroq, selektiv belgilarning genetik jihatdan o'zgartirilgan organizmlarga kotransformatsiyasi atrof-muhitga va insonga salbiy ta'sir ko'rsatadi. Antibiotiklarga chidamli bakteriyalarning chiqarilishi inson patogenlarining antibiotiklarga chidamliligini oshirishi mumkin. U mahsulot yoki biomassani antibiotiklar bilan ifloslantirishi va antibiotiklar degradatsiyasi va inaktivatsiyasi natijasida selektiv bosimni yo'qotishi mumkin.
01-rasm: Tanlanadigan markerli genlarni uzatish uchun plazmid vektor
Muxbir gen nima?
Reporter genlar - kiritilgan gen ifodasini aniqlash yoki o'lchash imkonini beruvchi genlar. Ushbu muxbir genlari ifodalangan joy yoki darajalarni bildirish uchun qiziqish genining tartibga soluvchi ketma-ketligiga biriktirilishi mumkin. Shu sababli, genlarning bir xil promotor ostida ekspressiyasi paytida ular bitta mRNK ketma-ketligiga transkripsiya qilinadi va keyin gen ekspresyon darajasini ko'rsatadigan oqsilga tarjima qilinadi.
Reporter genlari har xil turdagi boʻlib, ular odatda lyuminestsent va lyuminestsent oqsillarda ishtirok etadigan vizual tarzda aniqlanadigan xususiyatlarga ega. Floresan oqsili va fermentlarni kodlaydigan genlar, ko‘rinmas substratlarni lyuminestsent yoki rangli mahsulotlarga aylantirib, genning muvaffaqiyatli ifodalanishiga signal berib, gen ifodasini miqdoriy aniqlash imkonini beradi.
02-rasm: Reporter gen ifodasi
Selectable marker va Reporter gen oʻrtasidagi farq nima?
Selectable marker vs Reporter Gene |
|
| Tanlanadigan marker bu DNK ketma-ketligining bir turi boʻlib, oʻzgartirilgan hujayralarni oʻzgartirilmagan hujayralar bilan ajratishga yordam beradi. | Reporter geni xost hujayrasiga kiritilgan kerakli genning ifodasini aniqlashga yordam beradigan gendir. |
| Ishlab chiqarilgan birliklarning tabiati | |
| Genlar oʻsayotgan muhitda sunʼiy tanlashda yordam beruvchi xususiyatlar bilan kodlangan. | Genlar vizual tarzda aniqlanadigan xususiyatlar bilan kodlangan. |
| Foydalanish | |
| Antibiotikga chidamlilik genlari, antimetabolit genlari, gerbitsidlarga chidamlilik genlari va boshqalar tanlanadigan markerga misoldir. | Yashil lyuminestsent oqsil, b-glyukuronidaza, xloramfenikol atsetiltransferaza, qizil lyuminestsent oqsil va boshqalar uchun genlar kodi misoldir. |
Xulosa – Tanlanadigan marker va Reporter geni
Tanlash mumkin boʻlgan belgilar oʻzgartirilgan hujayralarga maʼlum antibiotik yoki gerbitsidlar qoʻshilgan tanlangan muhitda oʻsishiga imkon beradi. Ular o'zgartirilgan hujayralarni erta tanlash uchun ishlatiladi. Hisobotchi genlar kiritilgan kerakli genning ifoda darajasini aniqlash uchun ishlatiladi. Ular, shuningdek, o'zgartirilgan va o'zgartirilmagan hujayralarni farqlash imkonini beradi. Bu tanlangan marker va reportyor gen o'rtasidagi farq. Tanlanadigan marker ham, reportyor gen ham gen muhandisligida muhim markerlar hisoblanadi.
