Elektroforez va elektroosmoz
Fitrlash, distillash, ustun xromatografiyasi kabi jismoniy ajratish usullari ba'zi molekulalarni ajratishda oson usullar emas. Elektroforez va elektroosmoz zaryadlangan zarralarni ajratish uchun ishlatilishi mumkin bo'lgan yana ikkita ajratish usulidir.
Elektroforez nima?
Elektroforez - molekulalarni o'lchamlariga qarab ajratish usuli. Bu ajralish uchun asos molekulaning zaryadi va ularning elektr maydonida harakat qilish qobiliyatidir. Bu molekulyar biologiyada molekulalarni, ayniqsa DNK va oqsillarni ajratishning eng keng tarqalgan va asosiy usuli. Bu ko'pincha qo'llaniladi, chunki u nisbatan oson va arzon. Elektroforez apparati biroz murakkab bo'lishi mumkin va uni tayyorlash biroz vaqt talab etadi. Ammo biz laboratoriyada mavjud bo'lgan narsalardan osongina elektroforez apparati yasashimiz mumkin. Elektroforez usullari bizning maqsadlarimizga qarab farq qilishi mumkin. DNK yoki oqsilni ajratish uchun bir o'lchovli elektroforezdan foydalanishimiz mumkin. Ikki o'lchovli elektroforez ko'proq hal qilingan namunalar kerak bo'lganda qo'llaniladi (barmoq bosib chiqarishda bo'lgani kabi). Molekulalarni ajratish uchun qo'llab-quvvatlovchi vosita sifatida jel ishlatiladi. Ushbu jel tekis choyshab yoki naychalarda tayyorlanishi mumkin. Ushbu protseduraning asosi elektr maydoni ta'minlanganda molekulalarni jel orqali harakatlanish tezligiga qarab ajratishdir. DNK kabi manfiy zaryadlangan molekulalar bu elektr maydonida musbat qutb tomon harakat qiladi, musbat zaryadlangan molekulalar esa manfiy qutbga harakat qiladi. Elektroforezda agaroz va poliakrilamid sifatida ikki turdagi gellar qo'llaniladi. Bu ikkalasi turli xil hal qilish kuchlariga ega. Jel turli o'lchamdagi molekulalarni filtrlash uchun elak vazifasini bajaradi. Jelda o'rnatilgan elektrostatik zaryadlar kuch sifatida ishlaydi.
Ajratish ionlarning harakatchanligiga bog'liq.
F=fv=ZeE
V=ZeE/ f
F=zarrachaga ta'sir qiluvchi kuch
f=ishqalanish koeffitsienti
V=oʻrtacha migratsiya tezligi
Z=koʻchib yuruvchi zarracha zaryadi
e=asosiy toʻlov
E=elektr maydon kuchi
Elektroforez uchun zarur shartlar nisbatan oddiy. Jel tayyorlash va namunani ishga tushirishda bufer ishlatiladi. Vizuallashtirish uchun markerlar va bo'yoqlardan foydalaniladi.
Elektro-osmos nima?
Bu qoʻllaniladigan elektr maydon yordamida suyuqlikni material boʻylab harakatlantirish jarayoni. Harakat g'ovakli material orqali, kapillyar, membrana va boshqalar bo'ylab bo'lishi mumkin. Bu ajratish texnikasi (ayniqsa, kapillyar elektro-osmos) sifatida ishlatilishi mumkin. Suyuqlikning tezligi qo'llaniladigan elektr maydoniga chiziqli proportsionaldir. Bundan tashqari, kanalni qurish uchun ishlatiladigan materialga va ishlatiladigan eritmaga bog'liq. Interfeysda eritma va material qarama-qarshi zaryadga ega bo'lib, bu ikki qavatli elektr qatlami deb nomlanadi. Eritmaga elektr maydoni qo'llanilganda, elektr qo'sh qavat hosil bo'lgan Kulon kuchi bilan harakatlanadi. Bu elektro-osmotik oqim deb nomlanadi.
Elektroforez va elektro-osmoz o'rtasidagi farq nima?
• Elektroforezda qattiq zarralar (nuklein kislotalar yoki oqsillar kabi makromolekulalar) elektr maydon yordamida harakatga keltiriladi. Lekin elektro-osmosda suyuqlik harakatlanadi.
• Elektroforezda qoʻllab-quvvatlovchi qattiq material gel hisoblanadi. Ammo bu elektro-osmoz, bu jel, membrana, kapillyar va boshqalar bo'lishi mumkin.
