Asosiy farq – Qogʻoz va yupqa qatlam va ustun xromatografiyasi
Qog’oz xromatografiyasi, yupqa qatlam xromatografiyasi va ustunli xromatografiya uch xil xromatografik texnikadir. Qog'oz xromatografiyasi, yupqa qatlamli xromatografiya va ustun xromatografiyasi o'rtasidagi asosiy farq xromatografiya texnikasida ishlatiladigan statsionar faza turiga asoslanadi. Qog'oz xromatografiyasi statsionar faza sifatida tsellyuloza qog'ozidan foydalanadi, Yupqa qatlamli xromatografiya statsionar faza sifatida alumina yoki silika jelidan foydalanadi, Ustunli xromatografiya esa statsionar faza sifatida mos matritsali material bilan o'ralgan ustundan foydalanadi.
Oqsillar va uglevodlar kabi biomolekulalarni ajratish va identifikatsiyalash jarayonida xromatografiya muhim biofizika usuli hisoblanadi. Xromatografiya birikmalarni eruvchanligi, hajmi va zaryadiga qarab ajratadi. Ajratish mexanizmiga asoslanib, xromatografiya ion almashinuvi, yutilish, bo'linish va o'lchamni istisno qilish kabi mexanizmlardan foydalanadi va uchta xromatografik texnika mavjud; ya'ni qog'oz, yupqa qatlam va ustunli xromatografiya. Qog'oz xromatografiyasi birikmaning qattiq-suyuqlik adsorbsiyasi va eruvchanligiga asoslanadi va u statsionar faza sifatida tsellyuloza qog'ozidan foydalanadi. Yupqa qatlamli xromatografiya molekulalarning qattiq-suyuqlik adsorbsiyasiga asoslangan. Odatda alumina yoki silikageldan tayyorlangan statsionar faza va hal qiluvchi bo'lgan mobil faza mavjud. Ustunli xromatografiya matritsa bilan o'ralgan ustundan foydalanadi, u asosan molekulalarning o'lchami, yaqinligi yoki zaryadiga qarab ajratish uchun ishlatiladi.
Qogoz xromatografiyasi nima?
Qog'oz xromatografiyasi qo'llaniladigan eng oddiy xromatografiya turi bo'lib, u keng ko'lamli tadqiqotlar uchun ishlatilmaydi. U asosan talabalar laboratoriyalarida aralashmalarda mavjud bo'lgan aminokislotalar va uglevodlar kabi biomolekulalarni aniqlash uchun ishlatiladi. Qog'oz xromatografiyasi tsellyuloza qog'ozi yoki Whatman filtr qog'ozi yordamida tayyorlangan statsionar fazadan va odatda n-butanol va boshqalar kabi organik erituvchilar yordamida tayyorlanadigan mobil fazadan foydalanadi. Statsionar faza suv bilan to'yingan bo'lib, statsionar fazani suyuqlik qiladi. Shunday qilib, birikmalar aniqlanganda va harakatchan faza ishtirokida ishlashga ruxsat berilganda, birikmalarning eruvchanligiga qarab, ular ajratiladi. Shunday qilib, xromatogramma ishlab chiqilgandan so'ng, har bir birikmaning uzunligini aniqlash uchun binoni amalga oshirilishi mumkin. Shunday qilib, ushlab turish faktorini hisoblash mumkin.
01-rasm: Qog'oz xromatografiyasi
Qogʻoz xromatografiyasini erituvchining yoʻnalishiga qarab koʻtariluvchi qogʻoz xromatografiyasi va tushuvchi qogʻoz xromatografiyasi deb tasniflash mumkin.
Yupqa qatlam xromatografiyasi nima?
Yupqa qatlamli xromatografiya yoki TLC aralashmada mavjud bo'lgan turli aminokislotalarni aniqlash yoki oqsillarni aniqlash uchun keng qo'llaniladigan usuldir. Ajratish texnikasi qattiq-suyuqlik adsorbsiyasiga asoslangan. Yupqa qatlamli xromatografiya paytida statsionar faza sifatida alumina yoki silikageldan tayyorlangan plastinka ishlatiladi. Erituvchi aralashmasi talabga qarab o'zgaradi va erituvchini tayyorlash uchun n-butanol, sirka kislotasi va suv kabi turli xil organik birikmalardan foydalanishi mumkin. Ajraladigan aralashmalar plastinkada dog'lanadi va erituvchi aralashmasiga botiriladi. Plastinka tomonidan berilgan kapillyar ta'sir asosida erituvchi yuqoriga ko'tarilgach, plastinkada joylashgan birikmalar ham erituvchida eruvchanligiga qarab harakatlanadi.
02-rasm: Yupqa qatlam xromatografiyasi
Xromatogramma o'tkazilgandan so'ng dog'larni aniqlash turli xil bo'yash jarayonlari bilan amalga oshiriladi. Ba'zilar ningidrin bilan bo'yashdan foydalanadilar, bu juda zaharli bo'yash usulidir. Zamonaviy yupqa qatlamli xromatogrammalar yugurishdan keyin xromatogrammani ko'rish uchun floresans usullaridan foydalanadi. U bosib o'tgan masofalarga qarab, har bir birikmaning saqlash muddatini hisoblash mumkin. Bu ishlatilgan aralashma asosida ajratilgan birikma turini aniqlash uchun ishlatilishi mumkin. TLC asosan oqsil aralashmasidagi aminokislotalarni aniqlash, shuningdek aralashmada mavjud bo'lgan har xil turdagi monosaxaridlarni ajratish uchun ishlatiladi.
Ustun xromatografiyasi nima?
Ustunli xromatografiya - bu ustunga asoslangan ajratish usulidan foydalanadigan ko'plab turdagi xromatografiya usullarini tavsiflash uchun ishlatiladigan keng atama. Ustun xromatografiyasida birikmalarni ajratish uchun qadoqlash materiali bilan fizik ustun ishlatiladi. Ajratish birikmalar tomonidan namoyon bo'ladigan turli jismoniy xususiyatlarga asoslangan bo'lishi mumkin. Bu xususiyatlar zaryad, o'lcham, 3D moslashuv va bog'lash qobiliyati va boshqalar bo'lishi mumkin. Shunday qilib, matritsa materiali bilan o'ralgan ustun statsionar faza vazifasini bajaradi va ustunga qo'llaniladigan yuvish buferi mobil faza vazifasini bajaradi.
Agar molekulalar oʻlchamiga qarab ajratilsa, qadoqlash materiali aralashmalar oʻtishi uchun teshiklar qoldiradigan tarzda qadoqlanadi. Shunday qilib, g'ovaklardan oqib o'ta olmaydigan kattaroq molekulalar avval elutsiya qilinadi, kichikroq molekulalar esa ko'proq vaqt oladi.
03-rasm: Ustun xromatografiyasi
Agar molekulalar zaryadiga qarab ajratilsa, statsionar fazada anion yoki kation almashinuvchi bo'ladi, bu birikmalar zaryadiga qarab tortiladi. Shunday qilib, yuvish bosqichida bog'lanmagan birikmalar elutsiya qilinadi. Elyusiya tamponini qo'shgandan so'ng, bog'langan zaryadlangan birikmalar elutsiya qilinadi. Bu eluentlarni aniqlash asosan spektrofotometrik usullarga asoslangan.
Yupqa qog'oz qatlami va ustunli xromatografiya o'rtasidagi o'xshashliklar qanday?
- Aminokislotalar, oqsillar va uglevodlar kabi biomolekulalarni ajratish uchun barcha yupqa qogʻoz qatlami va ustunli xromatografiya uchta usuldan foydalaniladi.
- Yupqa qog'oz qatlami va ustunli xromatografiya texnikasi mobil faza va statsionar fazaga ega.
- Yupqa qog'oz qatlami va ustunli xromatografiya usullari ajratish uchun biofizik mexanizmlardan foydalanadi.
Yupqa qog'oz qatlami va ustunli xromatografiya o'rtasidagi farq nima?
Qogoz va yupqa qatlam va ustun xromatografiyasi |
|
| Qogoz xromatografiyasi | Qog'oz xromatografiyasi - suyuqlik-suyuqlik adsorbsiyasi va birikmaning eruvchanligi asosida birikmalarni ajratish uchun ishlatiladigan xromatografik usul. U statsionar faza sifatida tsellyuloza qog'ozidan foydalanadi. |
| Yupqa qatlam xromatografiyasi | Yupqa qatlam xromatografiyasi molekulalarning qattiq-suyuqlik adsorbsiyasiga asoslangan yana bir xromatografik usuldir. U alyuminiy oksidi yoki silikageldan tayyorlangan statsionar fazaga va mobil faza sifatida erituvchiga ega, bu erituvchidir. |
| ustun xromatografiyasi | Ustunli xromatografiya matritsa bilan oʻralgan ustundan foydalanadi, u asosan molekulalarni hajmi, yaqinligi yoki zaryadiga qarab ajratish uchun ishlatiladi. |
| Statsionar faza | |
| Qogoz xromatografiyasi | Vatmanning nitroselülozasidan tayyorlangan qog'oz qog'oz xromatografiyasida statsionar faza sifatida ishlatiladi. |
| Yupqa qatlam xromatografiyasi | Alumina yoki silikagel yupqa qatlam xromatografiyasining statsionar fazasi sifatida ishlatiladi. |
| ustun xromatografiyasi | Ustun xromatografiyasida statsionar faza sifatida mos oʻrash materiallari bilan oʻralgan ustun ishlatiladi. |
| Mobil faza | |
| Qogoz xromatografiyasi | Ishlaydigan erituvchi qog'oz xromatografiyasining mobil bosqichidir. |
| Yupqa qatlam xromatografiyasi | Ishlaydigan erituvchi yupqa qatlam xromatografiyasining harakatchan bosqichidir. |
| ustun xromatografiyasi | Yuvish buferi ustun xromatografiyasining mobil bosqichidir. |
| Ajratish uchun ishlatiladigan mexanizmlar | |
| Qogoz xromatografiyasi | Qogʻoz xromatografiyasi qattiq suyuqlikni singdirishga asoslangan. |
| Yupqa qatlam xromatografiyasi | Yupqa qatlamli xromatografiya qattiq suyuqlikni singdirishga asoslangan. |
| ustun xromatografiyasi | Ustun xromatografiyasi oʻlcham, zaryad va shaklni istisno qilishga asoslangan. |
| Elutsiya buferi | |
| Qogoz xromatografiyasi | Qogʻoz xromatografiyasi talab qilmaydi. |
| Yupqa qatlam xromatografiyasi | Yupqa qatlamli xromatografiya uchun talab qilinmaydi. |
| ustun xromatografiyasi | Ustun xromatografiyasida talab qilinadi. |
| Aniqlash | |
| Qogoz xromatografiyasi | Boyalar va ushlab turish faktorini aniqlash orqali. |
| Yupqa qatlam xromatografiyasi | Boyalar va ushlab turish faktorini aniqlash orqali. |
| ustun xromatografiyasi | Spektrofotometrik aniqlash. |
Xulosa – Yupqa qog’oz qatlami va ustun xromatografiyasi
Qog'oz xromatografiyasi, TLC va ustun xromatografiyasi oqsillar, aminokislotalar va uglevodlar (asosan monosaxaridlar) kabi biomolekulalarni ajratish uchun ishlatiladigan ajratish usullaridir. Qog'oz xromatografiyasi statsionar faza sifatida tsellyuloza qog'ozidan foydalanadi va ajratish mexanizmi qattiq-suyuqlik adsorbsiyasiga asoslangan. TLC qattiq-suyuqlik adsorbsion mexanizmlaridan ham foydalanadi. Molekulalar harakatchan fazadagi eruvchanligiga qarab statsionar fazada ajratiladi. Ustun xromatografiyasi ajratish uchun birikmaning hajmi, shakli, zaryadi va molekulyar og'irligi kabi jismoniy xususiyatlardan foydalanadi. Matritsa materiali bilan o'ralgan ustun statsionar faza vazifasini bajaradi, yuvish buferi esa erituvchi faza vazifasini bajaradi. Bu yupqa qog'oz qatlami va ustun xromatografiyasi o'rtasidagi farq.
